مطالعه ايريدو ويروس (Iridovirus) در مولدين تاسماهي ايراني (Acipenser persicus) با استفاده از روش PCR

Study on Iridovirus in Persian Sturgeon (Acipenser persicus) spawners using a Polymerase Chain Reaction (PCR) assay

ايريدوويروس ها با دارا بودن پنج جنس ايريدوويروس، كلريريدوويروس، راناويروس، لمفوسيستي ويروس و مگالوسيتي ويروس در تعداد زيادي ازگونه هاي ماهيان آب شيرين و شور ايجاد بيماري مي نمايند. نظر به اينكه ماهيان خاوياري از گونه هاي تجاري و بسيار ارزشمند درياي خزر محسوب شده و ايريدوويروس تاكنون در گونه هاي مختلفي از ماهيان خاوياري نظير تاسماهي سفيد، تاسماهي پاروپوزه، تاسماهي روسي و تاسماهي پاروبيني سفيد شناسايي شده است، لذا اين بررسي براي اولين بار در ايران بر روي مولدين تاسماهي ايراني (Acipenser persicus) صيد شده از سواحل جنوبي درياي خزر صورت پذيرفت. با توجه به جايگزين شدن و تكثير سريع اين ويروس در سلول هاي اپي تليال پوست و بويژه باله سينه اي، از مولدين مشكوك به اين ويروس، 150 نمونه باله تهيه و در فريزر C°20- نگهداري گرديد. به منظور انجام اين مطالعه از كيت تشخيصي IQ2000 استفاده شد. DNA نمونه ها با استفاده از روش و محلول هاي موجود در كيت استخراج گرديده و به منظور ارزيابي كيفيت آن ها بر روي ژل آگارز 1% الكتروفورز شدند. DNA هاي مناسب سپس با پرايمرهاي اختصاصي، PCR گرديدند. براي اثبات وجود باند، به ميزان 5 ميكروليتر از محصول PCR بر روي ژل آگارز 2%، الكتروفورز و با اتيديوم برومايد رنگ آميزي گرديدند. مطابق نمونه ارايه شده در كيت، تمامي نمونه هاي فاقد ايريدوويروس مي بايست باند PCR به ميزانbp 655 توليد نمايند كه در كليه نمونه ها باند مذكور ايجاد گرديد. براساس نتايج اين تحقيق مي توان اعلام نمود كه ايريدوويروس در مولدين بررسي شده تاسماهي ايراني مشاهده نگرديد.

Iridoviruses having five genera of Iridovirus, Chloriridovirus, Ranavirus, Lymphocystivirus and Megalocytivirus cause disease in many marine and freshwater fishes. This virus has been identified in different sturgeon species such as White sturgeon (Acipenser transmontanus), Paddlefish (Polyodon spathaula), Russian sturgeon (Acipenser guldenstaedtii) and Pallid sturgeon (Scaphirhynchus albus). Considering the importance of sturgeon species in Caspian Sea, this study carried out for the first time on Persian sturgeon spawners caught in southern coasts of Caspian Sea. Since Iridovirus usually stay in epithelial cells of skin, especially in fins and reproduced quickly. We preserved 150 samples of pectoral fins in -20°c freezer for DNA extraction using IQ2000 identification kit. DNA extracted using produce as well as solutions provided by the sets of kit. The DNA quality was assessed using 1% agaroze gel electrophoresis PCR performed using suitable DNA and specific primers. In order to check the quality of PCR product 5µl of PCR product, electrophoresed by 2% agaroze gel and stained by Ethidium Bromide. Based on the sample presented on the kit, all the samples which have not carrying out Iridovirus, should produce 655 base pair PCR band and this band created in all samples. Therefore, according to results obtained in this investigation no Iridovirus has been detected in Persian sturgeon brood stocks