ساخت cDNAي نوتركيب ژن‌VEGF-A با استفاده از آنزيم Eco31I

A New Approach to Synthesize Recombinant cDNA of VEGF-A gene by Eco31I Enzyme

امروزه، سنتز cDNAي ژن‌هاي مختلف به طور گسترده در حوزه‌ي بيوتكنولوژي مطرح بوده و به دليل كاربردهاي زياد cDNA روش‌هاي متعددي براي رسيدن به اين هدف پيشنهاد شده است. در ارتباط با بسياري از ژن‌ها، همواره نياز به يك روش ساده‌تر، سريع‌تر، دقيق‌تر و كم هزينه‌تر در راستاي سنتز cDNA آ‌ن‌ها مطرح بوده است. در مطالعه حاضر با استفاده از روش مبتني بر آنزيم‌هاي نوع (IIs (Eco31I اگزون‌هاي تشكيل دهنده ايزوفرم VEGF-111 از ژن VEGF - از طريق واكنش‌هاي PCR مجزا تكثير شده و در نهايت پس از انجام واكنش‌هاي هضم آنزيمي و Ligation، cDNA ايزوفرم VEGF-111 سنتز گرديد. در اين روش انجام مطالعات بيوانفورماتيكي و طراحي پرايمرهاي ويژه به كمك نرم افزار اليگو7 از اهميت بالايي برخوردار است. ايزوفرم VEGF-111 در بافت‌هاي نرمال بياني ندارد و تنها در لاين‌هاي سلولي‌ خاصي كه در معرض نور UV-B و يا گروهي از مواد ژنوتوكسيك قرار گرفته‌اند بيان مي‌شود؛ بنابراين سنتز cDNA آن از اهميت ويژه‌اي برخوردار است. VEGF-111 با توجه به ويژگي‌هاي رگ‌زايي قوي و مقاومت در برابر پروتيازهاي سلولي به عنوان يك فاكتور درماني نويدبخش در راستاي درمان بيماري‌هاي ايسكميك مطرح مي‌گردد.

Nowadays, cDNA is widely used in biotechnology and various methods have been suggested to obtain this goal due to its numerous applications. There is always a need for easier, faster, more accurate, and more cost-effective methods for recombinant cDNA synthesis of different genes. In this study, the involving exons of the VEGF-111 isoform related to VEGF-A gene were amplified through separate PCR reactions and finally VEGF-111 cDNA was synthesized after digestion and ligation reactions. In this method, the bioinformatics study and specific primer designing by Oligo 7 were very important. VEGF-111 isoform is not expressed in the normal tissue and is only expressed in UV-B and genotoxic agents treated cell lines; Therefore, VEGF-111 cDNA synthesis is of great significance. VEGF-111 is a promising therapeutic agent in myocardial ischemia due to its potent properties such as angiogenic and remarkable resistance to proteases.