عنوان مقاله :
همسانه سازي و بيان ژن ليپاز باسيلوسBacillus pumilus در مخمر Pichia pastoris
عنوان فرعي :
Cloning and Expression of a Lipase Gene from Indigenous Bacillus pumilus in Pichia pastoris
پديد آورندگان :
احمدپور، فتح اله نويسنده دانشجوي دكتري ژنتيك ملكولي- گروه بيوتكنولوژي صنعت و محيط زيست، پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري، تهران Ahmadpour, Fathollah , يخچالي، باقر نويسنده دانشيار، دكتري تخصصي ميكروبيولوژي ملكولي، گروه بيوتكنولوژي صنعت و محيط زيست، پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري، تهران Yakhchali, Bagher , علي فاطمي، سيدصفا نويسنده استاديار، دكتري تخصصي مهندسي شيمي گرايش بيوتكنولوژي، گروه بيوتكنولوژي صنعت و محيط زيست، پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري، تهران Ali Fatemi, Seyed Safa , كارخانه، علي اصغر نويسنده Karkhaneh, Ali Asghar , طالبي، سميرا نويسنده كارشناسي ارشد زيست شناسي سلولي ملكولي، گروه بيوتكنولوژي پزشكي، پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري، تهران، Talebi, Samira
اطلاعات موجودي :
فصلنامه سال 1392 شماره 0
كليدواژه :
باسيلوس پاميلوس , بيان , ليپاز , پيكيا پاستوريس , همسانه?سازي
چكيده فارسي :
ليپازها (تري آسيل گليسرول آسيل هيدرولازها EC 3.1.1.3) هيدروليز تري‌آسيل گليسرول به اسيدهاي چرب و گليسرول را در حد فاصل لايه چربي و آب كاتاليز مي‌كند. اين آنزيم‌ها كاربردهاي فراواني در صنايع غذايي، كشاورزي، روغن، چوب و كاغذ، پزشكي و دارويي دارند. در اين تحقيق ژن ليپاز باكتريايي باسيلوس پاميلوس بومي در ميزبان پيكياپاستوريس همسانه سازي و بيان شد. ژن ليپاز در حامل كلونينگ PGEM5Zf همسانه سازي شد و سپس با آنزيم هاي BamHI و EcoRI از حامل كلونينگ PGEM5Zf جدا و در حامل بياني Ppic9 كه با همان آنزيم ها برش خورده بود تحت كنترل راه انداز الكل اكسيداز همسانه?سازي شد. سازه حاصل پس از تاييد همسانه?سازي با روش‌هاي ملكولي و آنزيمي، از طريق روش الكتروپوريشن به درون ژنوم مخمر بياني پيكيا پاستوريس انتقال داده شد. بيان آنزيم ليپاز در محيط كشت مناسب با تست پارانيتروفنيل پالميتات(pNPP) و روش SDS-PGE بررسي شد. نتايج نشان دهنده بيان ليپاز نوتركيب به صورت پروتيين ترشحي بود.
چكيده لاتين :
Lipases (Triacylglycerol acylhydrolases; EC 3.1.1.3) catalyze the hydrolysis of triacylglycerol to glycerol and fatty acids at the interface between water and oil. These enzymes are versatile biocatalysts with a wide range of application in food, dairy, leather, paper, and pharmaceutical and detergent industries. In this study, mesophilic lipase gene from an indigenous Bacillus pumilus F3 was cloned and expressed in methylotrophic yeast Pichia pastoris. The lipase gene of 648bp with natural signal peptid sequence from B. pumilus F3 was amplified by PCR and inserted into the PGEM5Zf vector. The lipase gene was excised from the recombinant plasmid with BamHI and EcoRI enzymes and ligated to the pPIC9 linearized with the same enzymes. The recombinant plasmid was confirmed by the PCR and restriction enzyme digestion. The Bgl II linearized Ppic9 recombinant plasmid was introduced into the yeast P. pastoris GS115 by electroporation and confirmed by PCR. One of the lipase expressing P. pastoris transformants was cultivated in expression medium. The expression of the lipase gene was confirmed by p-nitrophenyl palmitate test and SDS-PAGE.
عنوان نشريه :
ژنتيك در هزاره سوم
عنوان نشريه :
ژنتيك در هزاره سوم
اطلاعات موجودي :
فصلنامه با شماره پیاپی 0 سال 1392
كلمات كليدي :
#تست#آزمون###امتحان
