مقايسه روش هايPCR-RFLP ، مستقيم ميكروسكوپي و كشتNNN در تشخيص ليشمانيوز جلدي

Comparison of PCR-RFLP, direct microscopy and NNN culture methods in the diagnosis of cutaneous leishmaniasis

زمينه و هدف: ليشمانيوز، بيماري عفوني انگلي با انتشار وسيع در مناطق معتدله و گرمسيري است. با توجه به اينكه ارتقا روش هاي تشخيص صحيح و سريع CL (Cutaneous Leishmaniasis) نقش به سزايي در كاهش عوارض بيماري به خصوص پيشگيري از بروز اسكارهاي وسيع دارد، هدف از اين مطالعه ارزيابي روش PCR-RFLP با پرايمرهاي ITSRL و L5.8Sدر مقايسه با روش هاي مستقيم ميكروسكوپي و كشت NNN براي تشخيص CL مي باشد. مواد و روش‌كار: در اين مطالعه از بين افراد داراي ضايعه ي جلدي مشكوك به CL،60 بيمار با Leishmanin Skin Test (LST) مثبت انتخاب و از هر كدام سه نمونه جهت بررسي ميكروسكوپي، كشت در محيط NNN وPCR–RFLP تهيه گرديد. لام‌هاي رنگ‌آميزي شده با لنز روغني×100 جهت مشاهده اشكال اماستيگوت انگل آزمايش شد. جهت كشت مقداري از مواد برداشت شده از حاشيه ضايعه بيمار به محيط NNN ، انتقال داده شد. پس از استخراجDNA با استفاده از روش PCR-RFLP تكثير از توالي ITS1 با پرايمرهاي اختصاصي صورت گرفت و بعد از هضم باآنزيم HaeIII ايزوله‌ها درمقايسه با سويه‌هاي استاندارد تعيين گونه شد. داده ها با استفاده از آمار توصيفي و تست حساسيت با استفاده از نرم افزار SPSS15 مورد تجزيه وتحليل قرار گرفت. يافته‌ها: روش ميكروسكوپي در 36 مورد از 60 بيمار (%60) و نتايج كشت نمونه ها در محيط NNN در 37 مورد (%62) مثبت شد. در روش PCR-RFLP 55 مورد (%91)، با اين روش مثبت و تعيين گونه شد. نتيجه گيري: با توجه به نتايج حاصل از اين مطالعه و امكان تشخيص گونه ها با روش PCR-RFLP، فراهم نمودن امكانات استفاده از اين تكنيك، همراه با روش مستقيم ميكروسكوپي و كشت NNN در موارد لازم، در مراكز درماني پيشنهاد مي گردد.

Background & Objectives: Leishmaniasis is a parasitic infectious disease with a wide clinical spectrum in tropical and subtropical areas. The aim of this study was to assess the PCR-RFLP method using two primers, ITSRL and L5.8S compared with direct microscopy and NNN culture methods for the diagnosis of cutaneous leishmaniasisis. Material & Methods: In this study among CL suspected patients, 60 patients with positive LST were selected and three samples were taken from each. To detect CL via direct microscopy, NNN culture and PCR-RFLP methods. Result:The results showed that 60%, 62% and 91% of specimens from suspected cases were positive using direct microscopy, NNN culture,and.PCR RFLP methods respectively. Conclusion:Due to high sensitivity of the PCR-RFLP method for detection and speciation of etiologic agent of CL, to establish an accurate and rapid method for detection of Leishmania parasites in medical centers, it is suggested the method is utilized along with NNN culture and direct microscopy.