طراحي واكنش زنجيره اي پلي مراز(PCR) جهت تشخيص مولكولي باكتري هموفيلوس آنفلوانزا

چكيده مقدمه: هموفيلوس آنفلوانزا مهم ترين عامل بيماري مننژيت در نوزادان و كودكان زير 5 سال است. از اين رو تشخيص سريع اين عامل ضروري است. مطالعات نشان داده است كه روش هاي مولكولي، تست هاي اختصاصي براي تشخيص سريع اين عامل هستند. هدف اين مطالعه، طراحي روش PCR جهت تشخيص سريع باكتري هموفيلوس آنفلوانزا بود. مواد و روش ها: در اين مطالعه پرايمر هاي اختصاصي بر اساس ژن ompp6 طراحي و واكنش PCR راه اندازي شد. جهت ساخت كنترل مثبت استاندارد، محصول PCR در وكتور pTZ57R/T كلون گرديد. حضور ژن مورد نظر در T- وكتور به وسيله پروسه هاي هضم آنزيمي و توالي يابي تاييد شد. حساسيـــت واكنش PCR، از طريق تهيه رقت هاي متوالي 1 به 10 از پلاسميد كنترل مثبت با غلظت اوليه 11 نانوگرم، تعيين شد. ويژگي واكنش با PCR بر روي DNAژنوميك طيفي از باكتري ها ارزيابي شد. يافته هاي پژوهش: نتايجPCR ، باند مورد انتظار با اندازه 280 جفت بازي را نشان داد. نتايج حساسيت، مشخص كرد كه كمترين حد تشخيصي واكنش 317 كپي است. هيچ گونه تكثيري پس از PCRبر روي DNA ژنوميك باكتري هاي كنترل منفي مشاهده نگرديد. اين نتيجه ويژگي واكنش PCR را تاييد نمود. بحث و نتيجه گيري: نتايج اين مطالعه نشان داد كه PCR ژن ompp6 باكتري هموفيلوس آنفلوانزا روشي با حساسيت و ويژگي بالا است و مي تواند به عنوان ابزاري در تشخيص سريع مننژيت ناشي از اين باكتري به ويژه در موارد مصرف آنتي بيوتيك توسط بيمار در آزمايشگاه هاي تشخيصي باشد.