بررسي اثرات كرايوپرزرويشن بر سلول هاي اپي تليال قبل و بعد از جداسازي از پرده آمنيون انساني

Effects of Cryopreservation on Epithelial Cells before and after Isolation from Human Amniotic Membrane

سابقه و هدف: يكي از تكنيك هاي جديد در نگهداري طولاني مدت سلول هاي بنيادي به منظور استفاده از آن ها در سلول درماني، استفاده از داربست هاي مختلف براي افزايش بازده كرايوپرزرويشن سلولي است . از مشكلات عمده كرايوپرزرويش، كاهش تعداد سلول هاي زنده و ايجاد تمايزهاي ناخواسته در سلو ل ها مي باشد مطالعه حاضر به منظور بررسي روش هاي احتمالي كاهش اين مشكلات، انجام شد و بدين منظور سلول هاي اپي تليال آمنيون انساني با استفاده از داربست پرده آمنيون كه داربست طبيعي اين سلول ها است كرايوپرزرو شدند. مواد و رو شها: در بررسي حاضر پس از تهيه بافت و جداسازي سلو لهاي اپي تليال آمنيون انساني، سلول ها در دو -196 در نيتروژن مايع به مدت 12 ماه نگهداري شدند °C گروه با داربست و بدون داربست در 24 حالت مختلف در دماي سلول ها، قبل و بعد از كرايوپرزرويشن بررسي شد . (pluripotency) و پس از آن درصد سلول هاي زنده و ميزان پرتواني مقايسه و آناليز گرديد. (Tukey Post-Test) ANOVA نتايج حاصل با روش آماري در گروه با داربست نسبت به Oct- يافته ها: نتايج حاصل از مطالعه حاضر نشان داد تعداد سلول هاي زنده و درصد بيان 4 گروه بدون داربست بيشتر بود. تعداد سلول هاي زنده و ميزان پرتواني در سلول هايي كه به همراه داربست كرايوپرزرو شده بودند با سلول هاي تازه جداشده تفاوت معني داري نداشت. همچنين حضور گليسرول در محيط ، ميزان بازده كرايوپرزرويشن را كاهش داد. استنتاج: مطالعه حاضر نشان داد كه استفاده از پرده آمنيون به عنوان يك داربست در كرايوپرزرويشن سلول هاي اپي تليال آمنيون انساني مي تواند تعداد سلول هاي زنده پس از كرايوپرزرويشن را افزايش داده و از ايجاد تمايزهاي ناخواسته طي نگهداري طولاني مدت جلوگيري نمايد.

Background and purpose: One of the recent techniques for increasing the output of cryopreservation is using different scaffolds in long-term preservation of stem cells for cell therapy. Undesirable differentiation and decrease in the number of viable cells are two major problems in this process. In order to overcome these problems, in this study the human amniotic epithelial cells were cryopreserved using amniotic membrane as their natural scaffold. Materials and methods: After tissue preparation and extraction of amniotic epithelial cells, the cells were preserved for 12 months in two different groups of with and without scaffold in 24 different patterns in -196°C in liquid nitrogen. The percentage of viable cells and their pluripotency were determined before and after cryopreservation. The data was analyzed using ANOVA (Tukey Post-Test) statistical method. Results: Cell viability and percentage of Oct-4 positive cells were higher in the group with scaffold. The difference between the number of viable cells and pluripotency was not statistically significant between freshly extracted cells and cells that were cryopreserved with scaffold. Moreover, glycerol decreased the output of cryopreservation. Conclusion: This study showed that employing amniotic membrane as a scaffold for cryopreservation of human amniotic epithelial cells could increase the number of viable cells and reduce the amount of undesirable differentiation in the process of cryopreservation.