ارزيابي كينتيكي آنزيم نيتريك اكسيد سنتاز استخراج شده از كليه گوسفند

Kinetic Activity of Isolated Nitric-oxide Synthase Enzyme from Sheep Kidney

و از ال - آرژ ين ين تو لي د شده و در (NOS) از طر ي ق نيتري ك اكس يد سنتاز (NO) سابقه و هدف : نيتري ك اكس يد پروسه هاي ف يزيولوژيكي و پاتولوژ يكي متعدد ي از س يستم هاي بيولوژيكي نقش دارد . در اين بررسي، فعالي ت هاي كينتيكي جدا شده از كليه گوسفند مورد ارزيابي قرار گرفت. NOS مواد و روش ها: با استفاده از تكنيك هاي هموژنيزاسيون، رسوب توسط سولفات آمونيوم و كروماتوگرافي ستوني روي از 500 گرم از بافت كليه گوسفند، جدا و خال ص ساز ي شد . در هر NOS آگاروز، آنزيم -ADP-5ʹ ، سلولز وʹ 2 DEAE-32 مرحله از روند خال صسازي اين آنزيم، مقدار پروتيين و فعاليت آن با استفاده از روش هاي برادفورد و گريس بررسي شد. 54 كيلو دالتو ن بود . فعالي ت ،SDS-PAGE كليه گوسفند در الكتروفورز NOS يافته ها: در اين بررسي، وزن ملكول ي و pH . 0 درصد (خلوص نسب ي 20 برابر ) به دست آمد / 0 واحد بر م يلي گرم پروتي ين و بازده خالص ساز ي آن نيز 9 / ويژه، 6 7 و 30 درجه سانتيگراد به دست آمد و انكوباسيون پروتيين نشان داد كه در محدوده / دماي اپت يم اين آنزيم نيز به ترتيب 4 دمايي 10 تا 30 درجه سا نتيگراد به مدت 15 دق يقه، آنز يم پا ي دار مي باشد . در غلظت 75 م يكرو مول از سوبستراي آنزيم به ترت يب 250 نانو مول در دق يقه در م يلي گرم پروتي ين Km و Vmax . مشاهده شد NOS ال-آرژينين، بيشترين فعا ليت 5 ميكرومول به دست آمد. / و 32 غلظت مناسب ،pH ، از كليه گوسفند با خلوص نسبي 20 برابر خالص سازي شد و دما ي اپت يمم NOS استنتاج: نزيم 75 ميكرومول، 250 نانو مول در دقيقه در ميلي گرم پروتيين ،7/ آن به ترتيب 30 درجه سانتيگراد، 4 Km و Vmax ، سوبسترا 5 ميكرومول به دست آمد.

Background and purpose: Nitric oxide (NO) is produced by nitric oxide synthase (NOS) from L-arginine and has an important role in a variety of physiological and pathological processes in biological systems. In this study, kinetic activities of isolated NOS were evaluated from sheep kidney. Materials and methods: In this reasearch homogenization, ammonium sulfate precipitation and column chromatography on DEAE-32 Cellulose and 2ʹ, 5ʹ-ADP-agarose of 500 grams of sheep kidney were used to purify isolated nitric oxide. In all steps of purification process the amount of protein and its activity was assayed using Bradford and Griess reactions. Results: The molecular weight of sheep kidney on SDS-PAGE electrophoresis was 54 KD. Specific activity was 0.6 units/mg protein and recovery of purification was 0.9% (relative purity was 20 times more). Optimum temperature and pH were 30°C and 7.4 and incubation of purified enzyme at thermal interval of 10 to 30°C for 15 minute showed a stable enzyme activity. At 75 ?M concentration of L-arginine substrate, the highest level of NOS activity was seen. The Vmax and Km of enzyme were 250 nmol/min/mg protein and 5.32 ?M, respectively. Conclusion: NOS enzyme from sheep kidney was purified with relative purity of 20 times and their optimum temperature, pH, suitable substrate concentration, Vmax and Km were 30°C, 7.4, 75 ?M, 250 nmol/min/mg proteins and 5.32 ?mol, respectively.