جداسازي سويه‌هاي O157 باكتري اشريشيا كلي و تعيين ژنهاي حدت آنها از گوشت چرخ شده و همبرگر در شهركرد

Isolation and determination of the virulence genes of Escherichia coli O157 in ground beefs and hamburgers in Shahrekord

هدف از اين مطالعه ارزيابي كيفيت بهداشتي و جداسازي سويه‌هاي O157 اشريشيا كلي و شناسايي ژنهاي حدت آنها بود، بر همين اساس تعداد 250 نمونه به تفكيك 125 نمونه گوشت چرخ شده و 125 نمونه همبرگر به صورت تصادفي از فروشگاه‌هاي سطح شهرستان شهركرد اخذ گرديد. جهت بررسي كيفيت بهداشتي اين محصولات پس از تهيه رقت و كشت در محيط مكانكي و گرمخانهگذاري، تعداد باكتري‌هاي كلي‌فرم مورد شمارش قرار گرفتند. برروي نمونه‌ها علاوه بر شمارش كلي‌فرم‌ها، آزمون‌هاي ديگري جهت بازيابي باكتري اشريشيا كلي صورت گرفت. همچنين برروي كلني‌هاي جدا شده آزمون‌هاي سرولوژي براي تشخيص سروتيپ O157 اين باكتري انجام شد. جهت شناسايي ژن‌هاي حدت سويه‌هاي O157 آزمون PCR بر روي جدايهها انجام شد. نتايج اين مطالعه نشانگر اين بود كه ميانگين تعداد كلي‌فرم در نمونه‌هاي گوشت چرخ شده CFU/g 103×7/1 و در نمونههاي همبرگر CFU/g 102×7/5 ميباشد كه از نظر آماري اختلاف مشاهده شده، بين تعداد كلي‌فرم در دو نوع محصول معني‌دار بود (P < 0.05). همچنين نتايج آزمون‌هاي ميكروبي نشانگر اين بود كه ميزان آلودگي گوشت‌هاي چرخ شده و همبرگر به باكتري اشريشيا كلي O157 2/3% ميباشد. اما آزمون‌هاي سرمي وجود سروتيپ O157:H7 را تاييد نكرد. همچنين نتايج آزمون PCR نشان داد كه سه جدايه (7/37%) واجد ژن‌هاي VT2 و eae مي‌باشند كه دو جدايه از گوشت‌هاي چرخ شده و يك جدايه از همبرگر جدا شده بودند ولي هيچ يك از جدايه‌ها واجد ژن‌هاي VT1 و hly نبودند.

The aim of this study was to determine the quality of ground meats and hamburgers and the contamination of these products with E. coli O157. A total of 250 samples (125 ground meats and 125 hamburgers) were collected for retails in Shahrekord. Microbiological examinations were done on the samples for coliform counting by making tenfold serial dilution and plating them with Mc.A media. To isolate the E. coli O157, samples were cultured in E.E broth containing Novobiocin and incubated at 37oC overnight. Subcultures were prepared on MC Sorbitol agar and incubated at 37oC for 24h. Suspected colonies were chosen, biochemical and serological tests were done on the colonies to confirm the E. coli O157 and O157:H7. The results of this study showed that the microbial quality of ground beefs and hamburgers are unacceptable according to the standard limit of Iran, the mean value of coliform were 1.75×103 CFU/g and 5.7 ×102 CFU/g respectively. Indeed 4 (3.2%) of the ground beefs and hamburgers were contaminated with E. coli O157, but none of them were E. coli O157:H7. PCR for detecting the virulence genes among the isolated E.coli O157 revealed that 37.7 % contain VT2 and eae genes. But other virulence genes (hly and VT1) was shown in none of the isolates.