تكثير يك cDNA از غدد زهري گونه‌هايي از عقرب‌هاي خانواده بوتيده به وسيله RT-PCR

Amlification of a cDNA from venom glands of Buthidae family scorpions by RT-PCR

در اكثر نقاط ايران، بويژه استان خوزستان، عقرب‌زدگي مشكلي جدي مي‌باشد. در خوزستان، بيشتر موارد عقرب‌گزيدگي ناشي از عقرب‌هاي خانواده بوتيده مي‌باشند به طوري كه تقريباً 41 درصد موارد به عقرب آندروكتونوس كراسيكودا تعلق دارد. زهر عقرب شامل تركيبات فعال بيولوژيك مختلفي از جمله انواع مختلف توكسين‌ها مي‌باشد كه هر كدام از آنها توسط ژن مخصوص به خود كد مي‌شوند. اطلاعات ژنتيكي در مورد تعيين توالي ژن‌هاي كد كننده توكسين‌هاي عقرب‌هاي خانواده بوتيده استان خوزستان در بانك بين‌المللي ژن موجود نيست. هدف از اين پژوهش تكثير cDNA كد كننده يك نروتوكسين از غده زهر عقرب‌‌هاي خانواده بوتيده مي‌باشد. نمونه‌هاي عقرب توسط آزمايشگاه رفرانس عقرب موسسه رازي اهواز تهيه و شناسايي شدند. با استفاده از محلول RNXTM ، مجموع RNA از غده زهر گونه‌هاي مزوبوتوس يوپيوس، هوتنتوتا زاگروسنسيس، هوتنتوتا سلسيي و آندروكتونوس كراسيكودا استخراج و غلظت RNA استخراج شده از هر نمونه توسط دستگاه اسپكتروفوتومتر اندازه‌گيري شد. سپس به منظور تكثير cDNA كد كننده نروتوكسين مورد نظر، آغازگرهاي همولوگ طراحي شدند. در ادامه با استفاده از تكنيك RT-PCR و پس از بهينه‌سازي شرايط PCR، قطعه cDNA با طولي حدود bp241 از غده زهري عقرب آندروكتونوس كراسيكودا تكثير گرديد.

In most areas in Iran, especially Khouzestan province, scorpion sting is a serious problem. In Khouzestan, most of the scorpion stings are due to Buthidae family of almost 41% belong to Androctonus crassicauda. Scorpion toxin consists of different biologic active components such as different types of toxins which are encoded by individual gene. There is no genetic information about sequence of genes coding toxins of Buthidae scorpion family of Khuzestan province in national center for biotechnology information (NCBI). The aim of this study was to amplify cDNA encoding a neurotoxin from venom gland of Buthidae family scorpions. Samples were provided and identified by Razi reference scorpion laboratory of Ahvaz. Using RNXTM solution, the total RNA was extracted from the venom glands of species of Mesobuthus eupeus, Hottentotta saulcyi, Hottentotta zagrosensis and Androctonus crassicauda and concentration of RNA samples were evaluated by spectrophotometer. In order to amplify cDNA encoding a neurotoxin, the degenerate primers have been designed. Using RT-PCR technique and after optimizing PCR conditions, an approximately 241 bp cDNA fragment from A. crassicauda was amplified.