عنوان مقاله :
مقايسه كمي توليد پروتيين نوتركيب انتهاي كربوكسيل نوروتوكسين بوتولينوم A در كشت هاي ناپيوسته و ناپيوسته خوراك دهي شده باكتري اشرشيا كلي
عنوان فرعي :
Quantitative Comparison of Recombinant Hc Domain of Clostridium Botulinum Neurotoxin A in Escherichia Coli in Batch and Fed-Batch Cultivations
پديد آورندگان :
ياري، خيراله نويسنده Yari, Kheirollah , فاطمي، سيد صفاعلي نويسنده استاديار، گروه زيست فناوري صنعت و محيط زيست، پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري، تهران، ايران Fatemi, Seyed Safa-Ali , تولايي، محمود نويسنده دانشيار، گروه زيست فناوري، مركز تحقيقات ژنتيك، دانشكده پزشكي، دانشگاه علوم پزشكي بقيه الله (عج)، تهران، ايران Tavallaei, Mahmood , مرادي، محمدطاهر نويسنده كارشناس ارشد ژنتيك، مركز تحقيقات بيولوژي پزشكي، دانشگاه علوم پزشكي كرمانشاه، كرمانشاه، ايران Moradi, Mohamad Taher
اطلاعات موجودي :
دو ماهنامه سال 1392 شماره 104
كليدواژه :
اشرشيا كلي , كلستريديوم بوتولينوم , كشت ناپيوسته خورا كدهي شده
چكيده فارسي :
A سابقه و هدف: پروتيين 50 كيلو دالتوني واقع در انتهاي كربوكسيل زنجيره سنگين نوروتوكسين كلستريديوم بوتولينوم تيپ
امروزه براي توليد واكسن نوتركيب عليه بوتوليسم به كار مي رود. هدف از اين پژوهش بررسي توليد اين پروتيين نوتركيب (BoNT/A-Hc)
در باكتري اشرشيا كلي در كشت هاي با تراكم سلولي بالا (ناپيوسته خوراك دهي شده) و مقايسه توليد آن با كش تهاي ناپيوسته بود.
اصلاح شده با فرايند كشت M مواد و روش ها: در اين مطالعه، رشد باكتري اشرشيا كلي حاوي پلاسميد نوتركيب در محيط 9
و زمان Isopropyl B-D-thiogalactoside ناپيوسته بررسي گرديد. به منظور افزايش بيان پروتيين نوتركيب، ميزان غلظت القاكننده
بهينه گرديد. سپس كشت ناپيوسته خورا ك دهي شده با Taguchi با حجم كاري 2 ليتر، به كمك روش آماري Fermentor القا در
روش خورا كدهي نمايي با حجم ثابت تا رسيدن به تراكم سلولي بالا انجام گرفت. در پايان ميزان بيان پروتيين نوتركيب هدف به كمك
محاسبه شد. SDS-PAGE و دانسيتومتري ژل Bradford روش
يافته ها: در شرايط بهينه شده كشت ناپيوسته و ناپيوسته خوراك دهي شده، به ترتيب مقدار 62 و 486 ميلي گرم پروتيين نوتركيب
به ازاي يك ليتر از محيط كشت حاصل گرديد. BoNT/A-Hc
استنتاج: بر اساس يافته هاي اين تحقيق مي توان نتيج ه گيري كرد كه رسيدن به تراكم سلولي بالا در كشت هاي ناپيوسته
خوراك دهي شده در افزايش بازدهي توليد پروتيين هاي نوتركيب بسيار موثر است.
چكيده لاتين :
Background and purpose: The 50 KDa protein (50 ?g) in carboxylic domain of the neurotoxin heavy
chain (BoNT/A-Hc) recognizes surface receptors on target neurons and this fragment contains the principle
protective antigenic determinants. Recently, this fragment has been used as a recombinant vaccine candidate for
botulism. The study aimed to compare the evaluation of BoNT/A-Hc production in fed-batch (high cell density
cultivation) and batch cultivation of recombinant Escherichia coli (E. coli.).
Materials and methods: In this research, growth of recombinant E. coli in batch culture was studied. In order
to maximize protein expression, induction time and Isopropyl B-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) inducer
concentration were optimized by the Taguchi statistical method. Then, fed-batch culture was applied to achieve high
cell density cultivation. Finally, the recombinant protein expression level was determined.
Results: In optimized conditions, 62 and 486 mg/l of soluble recombinant BoNT/A-Hc were produced in
batch and fed-batch cultivation.
Conclusion: According to the results, high cell density in fed-batch cultivation is a very effective for
improve of recombinant proteins productivity.
عنوان نشريه :
مجله دانشگاه علوم پزشكي مازندران
عنوان نشريه :
مجله دانشگاه علوم پزشكي مازندران
اطلاعات موجودي :
دوماهنامه با شماره پیاپی 104 سال 1392
كلمات كليدي :
#تست#آزمون###امتحان
