تاثير غلظت‌هاي مختلف ال- ترانس رتينوييك اسيد بر رشد و بقاي سلول‌هاي بنيادي فوليكول‌ موي موش سوري

The Effect of Different Concentrations of All-Trans Retinoic Acid on the Growth and Survival of Mouse Hair Follicle Stem Cells

زمينه و هدف: سلول‌هاي بنيادي فوليكول مو چند توانه هستند و در ناحيه‌ي بالج واقع در فوليكول مو قرار دارند. اين سلول‌ها قدرت تكثيري بالايي دارند. رتينوييد‌ها باعث متمايز شدن سلول‌هاي اپيدرم و كراتينه شدن آن‌ها مي‌شود. ال- ترانس رتينوييك اسيد براي درمان برخي بيماري‌هاي پوستي نظير ملاسما، ايكتيوز و اكنه استفاده مي‌شود، لذا مطالعه‌ي تاثير ال- ترانس رتينوييك اسيد روي سلول‌هاي بنيادي فوليكول مو و تعيين غلظت موثر آن براي بقاي سلول‌هاي بنيادي فوليكول مو ضروري به نظر مي‌رسيد. روش بررسي: در اين مطالعه، سلول‌هاي بنيادي فوليكول موي مشتق از سبيل موش سوري Balb/c بعد از جداسازي و كشت در آزمايشگاه، تحت تيمار غلظت‌هاي مختلف ال- ترانس رتينوييك اسيد قرار گرفت. غلظت‌هاي 5/0 تا 20 (به ترتيب: 5/0،1، 5، 10، 15 و 20) ميكرومولار ال- ترانس رتينوييك اسيد براي بررسي اثرات مهاري يا تكثيري مورد بررسي قرار گرفت. اثرات سيتوتوكسيسيتي رتينوييك اسيد، با استفاده از روش MTT بررسي شد. جهت بررسي مرگ و مير و بقا‌ي سلول‌ها، از روش رنگ‌آميزي آكريدين اورنج/اتيديوم برمايد استفاده شد و نتايج با ميكروسكوپ فلورسنت مورد بررسي قرار گرفت و تعداد سلول‌هاي زنده، آپوپتوتيك و نكروتيك با استفاده از نرم‌افزار Image J شمارش شدند. يافته‌‌ها: نتايج حاصل از رنگ آميزي نشان داد كه غلظت 10 ميكرومولار و بالاتر ال- ترانس رتينوييك اسيد باعث مرگ آپوپتوتيك و نكروتيك سلول‌هاي بنيادي فوليكول مو مي‌شود و مقدار IC50 به‌دست آمده از منحني پاسخ غلظت، 03/1±38/14 ميكرومولار بود. نتيجه‌گيري: يافته‌هاي اين مطالعه نشان داد كه سلول‌هاي بنيادي فوليكول موي موش سوري در صورتي‌كه در آزمايشگاه، تحت تاثير غلظت‌هاي بالاتر از ده ميكرومولار قرار گيرند با مرگ آپوپتوز يا نكروز از بين مي‌روند و لذا از غلظت‌هاي بالاتر ال- ترانس رتينوييك اسيد مي‌توان جهت از بين بردن مو‌هاي زايد استفاده كرد و از غلظت‌هاي پايين اين ماده هم مي‌توان جهت درمان بيماري‌هاي پوستي استفاده نمود. واژگان كليدي: سلول‌هاي بنيادي فوليكول مو، رتينوييك اسيد، آپوپتوز، نكروز

Background and Objective: Hair follicle stem cells are multipotent, located in the bulge area, and are highly proliferating. Retinoids have an effect on epidermal differentiation and keratinization. Retinoic acid is used to treat some skin diseases such as Melasma, Acne and Ichthyosis. So, the study of all-trans retinoic acid effect on hair follicle stem cells and determination of the effective concentration of retinoic acid on hair follicle stem cell survival seems to be essential. Materials and Methods: In this study, we isolated and cultured hair follicle stem cells derived from Balb/c mice Whisker follicles. Then, the cells were treated with different concentrations of all-trans retinoic acid. 0.5 to 20 µM of all-trans retinoic acid was used to evaluate inhibitory or proliferative effects. MTT assay was used to evaluate cytotoxicity of all-trans retinoic acid. To investigate cell death and survival, we used acridine orange/ethidium bromide staining method. The results were analyzed by fluorescent microscopy. Apoptotic and necrotic cell numbers were counted using Image J software. Results: Results indicated that apoptotic, rather than necrotic, cell death was caused by 10µM and higher concentrations of retinoic acid. The IC50 value determined by the dose response curve was found to be 14.3 µM. Conclusion: Results of this study indicate that if hair follicle stem cells expose to high concentrations of all-trans retinoic acid, the cells may undergo apoptotic or necrotic cell death. Therefore, higher concentrations of retinoic acid can be used to eliminate redundant hairs and low concentrations can be used for the treatment of skin diseases. Keywords: Hair follicle stem cells, Retinoic acid, Apoptosis, Necrosis