توليد سلول‌هاي بنيادي روياني با استفاده از رويان‌هاي شبيه سازي شده در گاوميش

Production of Buffalo Embryonic Stem Cell from HMC Embryos

سلول‌هاي بنيادي روياني از لايه زاينده داخلي رويان در مرحله بلاستوسيست توليد مي‌شوند و توانايي تمايز به تمام سلول‌هاي لايه زاينده رويان را دارند. در اين تحقيق سلول‌هاي بنيادي روياني از بلاستوسيست‌هاي حاصل از شبيه سازي به روش Hand Made Cloning (HMC) توليد شدند و كارايي آنها با سلول‌هاي بنيادي روياني حاصل از لقاح آزمايشگاهي مقايسه گرديد. براي كشت سلول‌هاي بنيادي از لايه تغديه كننده بعلاوه محيط كشت حاوي Knockout-Dulbecco?s Modified Eagleʹs Medium (Ko-DMEM)، Knockout Serum Replacement(KSR)، Leukemia Inhibitory Factor (LIF)، Basic Fibroblast Growth Factor-2 (FGF-2)، ال- گلوتامين، اسيدهاي آمينه غير ضروري و جنتامايسين استفاده شد. جهت شناسايي سلول‌هاي بنيادي از شناساگرهاي سطح سلولي SSEA-1، SSEA-4، TRA-1-60 و TRA-1-81 و پرتواني OCT3/4، SOX2 وNANOG استفاده گرديد. نتايج نشان دادند، كه نرخ رشد سلول‌هاي بنيادي حاصل از لقاح آزمايشگاهي بطور معني داري بيشتر از سلول‌هاي بنيادي حاصل از شبيه سازي بود (به ترتيب 120 درصد در مقايسه با 65 درصد). با اين وجود، نتايج حاصل از بررسي بيان ژن نشان داد، اختلاف معني داري در بيان ژنهاي OCT3/4، SOX2 و C-MYC بين سلول‌هاي بنيادي حاصل از شبيه سازي و لقاح آزمايشگاهي مشاهده نگرديد، تنها اختلاف مشاهده شده مربوط به بيان ژن NANOG است، كه در سلول‌هاي بنيادي حاصل از شبيه سازي بطور معني داري افزايش يافت. سلول‌هاي بنيادي حاصل از هر دو منشا قابليت پرتواني خود را براي بيش از دو سال حفظ كردند و به سلول‌هاي مختلف از جمله سلول‌هاي عصبي، پوششي، چربي و عضلاني تمايز يافتند

Embryonic stem cells (ESCs) are derived from the inner cell mass (ICM) of blastocyst and differentiate into all three embryonic germ layers: ectoderm, endoderm, and mesoderm. In this study, ESCs are derived from Hand Made Cloning (HMG) blastocysts and their efficiencies compared to ESCs derived from In Vitro Fertilization (IVF) embryos. Feeder layer was used for ESCs culture, and culture medium consisting of Knockout- Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (Ko-DMEM) supplemented with Knockout Serum Replacement (KSR), Leukemia Inhibitory Factor (LIF), Basic Fibroblast Growth Factor-2 (FGF-2), L-glutamine, nonessential amino acids and gentamicin. The cell surface antigens used for characterization were the SSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60 and TRA-1-81 and the pluripotency markers were NANOG, OCT3/4 and SOX2. Results showed that, the growth rate of ESCs colonies in ESCs from IVF embryos was significantly higher than ESCs from HMG embryos (120% compared with 65%, respectively). Not only real-time PCR results revealed the same expression level of SOX2, OCT3/4 and cMYC between them, but also ESCs from HMG embryos resulted to higher expression of NANOG. Both of ESCs groups maintain in pluripotency state for more than two years and differentiated to the different types of cells like neuron, epithelial, lipid and muscle cells.