تراريزش گياه گندم با استفاده از ژن fld به روش تفنگ ژني

تنش هاي غيرزيستي از جمله خشكي و شوري اولين عامل كاهش محصول در دنيا بوده و در اغلب محصولات مهم زراعي باعث كاهش شديد توليد محصول مي شود. استفاده از روش هاي مهندسي ژنتيك يكي از گزينه هاي موجود جهت افزايش تحمل گياهان به تنش هاي غيرزيستي مي باشد. در اين تحقيق به منظور توليد گياه گندم تراريخته متحمل به تنش هاي غيرزيستي، از روش تفنگ ژني و وكتور p6U-Ubi-FVT1 استفاده شد. اين وكتور حاوي ژن نشانگر باكتريايي استرپتومايسين و نشانگر گياهي هيگرومايسين و ژن fld (فلاودوكسين) با منشا سيانو باكتري مي باشد. فلاودوكسين نقشي مشابه فردوكسين ايفا كرده و قادر است با جلوگيري از وقوع اغتشاشات در چرخه انتقال الكترون و ممانعت از تشكيل گونه هاي فعال اكسيژن، آسايش گياه را فراهم كند. بدين منظور از كالوس هاي جنين زاي ارقام بهار، لاين A، پيشتاز، 83 N- و ارقام پاييزه زرين و S-87به عنوان بافت هدف براي تراريزش استفاده شد. نتايج نشان داد ريز نمونه كالوس جنين زا رقم بهار با 51/6% شاخه زايي و 35/3% ريشه زايي بيشترين باززايي را در مقايسه با ساير ارقام دارند. بيشترين درصد شاخه زايي، ريشه زايي مربوط به رقم بهار و كمترين آن مربوط به رقم زرين و S-87 بود. در اين تحقيق 36 بار بمباران با استفاده از تفنگ ژني انجام شد و تعداد شش گياه رقم بهار و يك گياه رقم لاين A توليد شد. آناليز PCR روي يك گياه رقم لاين A و شش گياه رقم بهار انجام شد. نتايج آزمايش وجود حداقل يك نسخه از ژن هدف را در ژنوم گندم يك گياه رقم لاين A تاييد كرد. بيشترين درصد تراريزش مربوط به رقم لاين A بود كه اين مقدار برابر با 007/0 بود در نهايت آزمون لكه گذاري تاييد بيشتر تلفيق ژن را در گندم هاي تراريخته تاييد كرد.

Abiotic stresses such as drought and salinity are the most important causes of sever reduction of the crop yields in the world that genetic engineering could improve the tolerance of crops to these stresses as one of the suitable and available solution. In this study to produce transgenic wheat which has the tolerant to abiotic stresses gene gun method and p6U-Ubi-FVT1 as vector was used. This vector has streptomycin and hygromycin marker and fld cyanobacteria offspring gene. Flavodoxin plays the same role of fredoxin which prevents the problems of electron transport system and active oxygene species formations. Embryogenic callus of Bahar, Line A, Pishtaz, N-83, Zarin and S-87 variety of Wheat were used for this study. Results showed embryogenic callus of Bahar variety by 6.51 percent of shooting and 3.35 percent of rooting has the most regenerating rate and Zarin and S-87 had the less regeneration ability in comparison of other variety. Gene bombardment was done 36 times and PCR analysis was done on 6 Bahar and 1 line A plantlets which proved the gene transferring in Line A plantlet. The highest amount of transgenes was by Line A variety which owned 0.007 percent. Also Dot blot analysis validates the gene transfer in the plantlet.