تشخيص زودهنگام فاسيولوزيس در گوسفند با استفاده از اليزا

Early diagnosis of sheep fasciolosis with Enzyme Linked Immunosorbant Assay (ELISA)

تشخيص سريع بيماري فاسيولوزيس، از اهميت خاصي برخوردار است زيرا با درمان دام‌هاي آلوده در سه ماه اول آلودگي، هم از زيان‌هاي اقتصادي و هم از آلودگي محيط جلوگيري مي‌شود. در اين مطالعه، از روش ELISA براي تشخيص آلودگي در هفته‌هاي اول، استفاده گرديد. براي اين منظور، از 50 گوسفند كمتر از يكسال و غيرآلوده استفاده شد و به روش تجربي، به فاسيولا ژيگانتيكا آلوده شدند. در آزمايشگاه از حلزون ليمنه گدروزيانا، به عنوان ميزبان واسط استفاده گرديد. به هر گوسفند، 100 متاسركر فعال و زنده، خورانده شد. از گوسفندان، قبل از آلودگي، هفته‌هاي اول، دوم و سوم، سپس ماه‌هاي اول، دوم، سوم تا ششم پس از آلودگي، خون‌گيري انجام شد. از سرم همين 50 راس گوسفند غيرآلوده و قبل از آلودگي به فاسيولا، 15 راس گوسفند آلوده به كيست هيداتيك و 15 راس آلوده به اورنيتوبيلارزيا تركستانيكم، به عنوان گروه شاهد، استفاده شد. براي آزمايش ELISA، از آنتي‌ژن دفعي ـ ترشحي استفاده گرديد. مقدار 5 ميكروگرم در ميلي‌ليتر، به عنوان بهترين غلظت آنتي‌ژن انتخاب گرديد. از كونژوگه پراكسيداز Anti-sheep IgG (سيگما) با رقت 1 به 000/10 و سرم گوسفندان با رقت 1 به 200 به عنوان بهترين رقت‌ها استفاده گرديد. ميزان جذب نوري (Optical Density) 743/0 به عنوان حد مرز مثبت و منفي (Cut-Off) آزمايش، مشخص شد. در اين مطالعه مشخص گرديد كه در هفته سوم پس از آلودگي تجربي، بيماري قابل تشخيص مي‌باشد. در هفته سوم آلودگي، 94 درصد موارد مثبت، تشخيص داده شدند اما در هفته دوازدهم پس از آلودگي، تيتر آنتي‌بادي ضد انگل، به حداكثر رسيد. حساسيت تست، 96 درصد، ويژگي آن 7/83 درصد، ارزش پيشگويي مثبت آن، 7/78 درصد و ارزش پيشگويي منفي آن 1/ 97 درصد و در نهايت، كارايي آزمايش 4/ 88 درصد مي‌باشد.

Early diagnosis of fasciolosis in livestock is important for timely prevention of the disease and economic losses. In this study, ELISA method was employed for early diagnosis of infection. For this purpose, 50 sheep of less than one year of age were infected experimentally with 100 metacercaria of Fasciola gigantica, while Lymnaea gedrosiana was used as an intermediate host in this experiment. Blood was drawn from the sheep at 1st, 2nd and 3rd weeks prior to infeetion; also at months 1 to 6 after the infection. As a control, the serum of 50 sheep prior to their infection with Fasciola gigantica, and 15 sheep infected with hydatid cyst and another 15 infected with Ornitobilharzia turkestanicum were used. For ELISA, 5 µg of excretory-secretory antigens and 1: 10000 Anti-sheep IgG peroxidase conjugate were used. The serum was diluted to 1:200 and cut-off OD of 0.743 was selected for these tests. The results indicated that in third week of infection the disease was diagnosed and 94% of the cases were appeared positive, while in the twelfth week, the antibody titer was at its maximum. The sensitivity and specificity of the test were 96% and 83.7%, respectively.