مطالعه و شناسايي مولكولي Brucella spp.در محصولات لبني توسط تكنيك Nested PCR

Study and detection of molecular Brucella spp. in dairy products with Nested PCR technique

چكيده سابقه و هدف: بروسلا يك كوكوباسيل گرم منفي است كه ميزبانهاي آن شامل انسان، گاو، بز، گوسفند و اسب مي باشد. بروسلا از طريق شير و فراورده هاي لبني انتقال يافته و در انسان سبب ايجاد تب مالت مي شود. روشهاي سرولوژيك تشخيص آن از حساسيت و دقت كافي برخوردار نبوده، علاوه بر آن، داراي نتايج مثبت و منفي كاذب فراواني مي باشند. هدف از اين مطالعه بررسي ميزان شيوع بروسلا در برخي از محصولات لبني توسط تكنيك PCR Nested و تعيين حساسيت و دقت اين تكنيك مي باشد. مواد و روشها: در اين مطالعه 208 نمونه از محصولات لبني شامل: 57 نمونه شير خام گاو ، 34 نمونه شير پاستوريزه ، 28 نمونه پنير پاستوريزه ، 23 نمونه پنير سنتي، 33 نمونه شير خام بز و 33 نمونه شير خام گوسفند، از سطح استان تهران جمع آوري گرديد. DNA نمونه ها به وسيله كيت (Cinna gene, Iran) DNP استخراج شد. سپس تست PCR Nested با كمك پرايمرهاي اختصاصي بهينه گرديد، حساسيت و اختصاصيت تكنيك مورد ارزيابي قرار گرفت. يافته ها: بررسي ها نشان داد از 57 نمونه شير خام گاو، 19 نمونه ، و از 34 نمونه شير پاستوريزه، 10 نمونه، همچنين از 28 نمونه پنير پاستوريزه فقط، 8 نمونه، و از 23 نمونه پنير سنتي، 14 نمونه و از 33 نمونه شير خام بز، 21 نمونه و در آخر از 33 نمونه شير خام گوسفند ، 19 نمونه PCR مثبت شدند. نتيجه گيري: نتايج نشان مي دهد، تكنيك Nested PCR مورد بررسي در اين مطالعه از حساسيت و دقت بالايي برخوردار است. از اين رو، به نظر مي رسد ضرورت استفاده از روشهاي مولكولي به عنوان يك روش تاييدي جهت تشخيص بروسلا در كنار روشهاي متداول غربالگري امري لازم مي باشد.

Aim and Background: Brucella spp. is a gram negative coco bacillus which has different hosts including human, cow, goat, sheep and horse. Brucella spp. is transferred via milk and dairy products causing a Malta fever in human. Serological methods for Brucella spp. detection do not have sufficient sensitivity and accuracy; in addition, they have great false positive and negative results. The aim of this study is to assess the prevalence of Brucella spp. in dairy products with Nested PCR technique and evaluation of specification and sensitivity of this technique. Material and methods: In this study 208 samples from dairy products including: 57 raw cow milk, 34 pasteurized cow milk, 28 pasteurized cheese, 23 traditional cheese, 33 raw goat milk and 33 raw sheep milk samples, were collected from Tehran and suburbs. DNA was extracted using DNP kit (Cinnagene, Iran) from samples. After optimization of first and second round of PCR for Nested, with the help of each specific primer, sensitivity and specificity technique was evaluated. Results: The studies showed, Among 57 samples of raw cow milk, 19 cases were PCR positive. In 34 pasteurized milk samples 10 cases were PCR positive, from 28 pasteurized cheese samples only 8 cases, from 23 traditional cheese DNA samples 14 cases, out of 33 samples of raw goat milk 21 cases and finally from 33 samples of raw sheep milk 19 cases were PCR positive. Conclusion: With respect to this result, Nested PCR technique investigated in this study, has significant sensitivity and accuracy; therefore, the molecular technique as a confirmatory method in detection of Brucella spp. seems necessary and inevitable for serological methods.