مقايسه دو روش فيزيكي و آنزيمي برداشت سلول از ظرف كشت از طريق فلوسايتومتري

Comparison between Physical and Enzymatic Harvesting Methods via Flow Cytometry

زمينه: كشت سلول به‌منظور دستيابي به اهداف آزمايشگاهي مختلفي صورت مي گيرد. جداسازي سلول از ظرف كشت براي انجام آزمايشات ديگر به روش هاي مختلفي انجام مي شود. يكي از اين روش هاي جداسازي سلول چسبنده از ظرف، استفاده از آنزيم هاي جداكننده مانند تريپسين است. اين عمل ممكن است توام با اثرات جانبي ناشي از تاثير هضم آنزيمي بر ساير جنبه‌هاي حياتي سلول ها باشد. براي اجتناب از اين امر با روش استفاده از ابزار فيزيكي، مي توان سلول ها را از ظرف جدا كرد. به‌نظر مي رسد آسيب فيزيكي، بقا سلول ها را نيز تهديد مي كند. در اين مقاله، اين دو نوع آسيب با استفاده از روش فلوسايتومتري بررسي و مقايسه مي شوند. روش ها: دودمان سلولي MKN45 كه از نـوع سلول هـاي سرطاني معـده بـوده و در محيط RPMI با دمـاي ?C37 و 5 درصد دي‌اكسيد كربن كشت داده شده و بعد از رسيدن به تراكم 80 درصد ، به دو روش هضم و فيزيكي از ظرف كشت، جدا و وضعيت حياتي سلول ها از طريق روش فلوسايتومتري مورد بررسي و سپس آناليز قرار گرفته است. يافته ها: نتايج حاصله نشان داد كه برداشت فيزيكي، نسبت به روش آنزيمي، سبب وقوع نكروز سلولي بيشتري مي شود. اين اختلاف معنادار از طريق مشاهدات ميكروسكوپي مورد تاييد بوده است. نتيجه گيري: با توجه به وقوع مرگ سلولي كم‌تر ناشي از اعمال هضم آنزيمي، به‌نظر مي‌رسد كه روش هضم آنزيمي در مقايسه با روش فيزيكي براي برداشت سلول از ظرف كشت روش بهينه تري است.

Background: Cell culture is used in laboratory for variety of purposes. In addition, there are different cell harvesting methods. One of these methods is enzymatic method. In this method cells are separated from the plate via using enzyme such as Trypsin. This method, along with side effects of enzyme digestion effect, may affect other parts of cell. To avoid this, via using physical method cells would be separated from the plate. If this method be used it seems that, physical method could possibly damage survival of the cells. In this study, two kinds of damages were compared using Flow Cytometry. Methods: MKN45 gastric cancer cells were cultured in RPMI at 37 ?C and 5 %CO2 and after reaching to 80% density, they were separated from the plate using both physical and digestion methods. Then cell status was evaluated and analyzed using flow cytometry method. Results: Results showed that cell death rate was higher using physical method than enzymatic method. This significant difference was confirmed by microscopic observations. Conclusion: Since using enzymatic method leads to low cell death rate, it seems that using this method is better than physical method for separation of cells from the plate.