رديابي و شناسايي عوامل قارچي مولد زوال مو بر اساس تكنيك پي سي آر در باغات انگور خراسان شمالي

Detection and identification of some fungal agents causing grapevine decline in Northern Khorasan Province vineyards using PCR technique

يكي از مهم‌ترين و مخرب‌ترين بيماري‌هاي قارچي انگور بيماري اسكا يا زوال مو مي‌باشد. اين بيماري باعث كاهش رشد، كاهش محصول و در نهايت مرگ گياه مي‌گردد. در طي تابستان 1389 از تاكستان‌هاي شهرستان بجنورد و حومه‌ي آن نمونه‌هاي مختلفي از تنه شامل: قطعات تنه داراي علايم پوسيدگي سفيد، داراي علايم پوسيدگي قهوه‌اي، داراي علايم نقاط قهوه‌اي رنگ و فاقد علايم ظاهري نمونه برداري شد. هدف از اجراي اين تحقيق رديابي عوامل قارچي مرتبط با بيماري اسكا در داخل تنه انگور با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي و همچنين جداسازي آنها به روش كلاسيك و مقايسه آن با روش ملكولي بود. جهت رديابي عوامل اسكا از آغازگر‌هاي عمومي‌نواحي دي-ان-آ ريبوزومي و آغازگرهاي اختصاصي استفاده شد. نتايج حاصل از PCR با آغازگر‌هاي اختصاصي در اين تحقيق به صورت مشاهده ي باند‌هاي bp550، bp360 و bp415 به ترتيب براي قارچ‌هاي F. mediterranea، Pa. chlamydospora و spp. Phaeoacremonium بود. نتايج حاصله نشان داد كه در مجموع گونه‌ي Pa. chlamydospora از فراواني بيشتري برخوردار است و در اكثر نمونه‌هاي مورد بررسي اين گونه با درصد بالاتري نسبت به ساير عوامل قارچي جداسازي و رديابي گرديد و كمترين فراواني نيز مربوط به گونه‌ي F. mediterranea بود كه فقط در چوب‌هاي داراي علايم پوسيدگي سفيد رديابي گرديد. بنابراين آغازگر‌هاي اختصاصي مورد مطالعه مي‌تواند در سالم سازي خزانه‌هاي انگور عاري از بيماري اسكا مورد استفاده قرار گيرد.

One of the most significant and destructive grapevine diseases is Esca which is caused by several fungal species. Trunk disease causes stunted growth, reduced yield, and ultimately, vine death. For this reason, during the summer 2011, infected samples were collected from Bojnourd (North Khorasan province) vineyards. Infected trunk samples were acquired that they were showing white and brown rots, dark brown spots and also samples without apparent symptoms. The aims of this work were, firstly, to apply species –specific primers for detecting fungal agents associated with Esca disease of grapevine; and comparing this method to the classical ones, and secondly, to detect frequency of each pathogenic agent using molecular and classical methods. In molecular method, species-specific primers which designed based on ITs region of rDNA were used to detect fungal agents of the Esca disease. They yielded a single amplicon of 550 bp, 360bp and 415 bp for F.mediterranea, Pa. chlamydospora and Phaeoacremonium spp. respectively. Results showed that the maximum frequency of incidence was related to P. chamydospora and Phaeoacremonium spp was in second. The lowest incidence frequency rate was related to F.mediterranea which was observed only in sample with white rot symptoms. Primers defined here can be used in the nursery sanitation program to produce plant free of Esca disease.