توليد سازه ژني نوتركيب حاوي قطعه كد كننده هپسيدين انساني

Production of Recombinant Vector Containing the Coding Sequence of Human Hepcidin

چكيده مقدمه:هپسيدين يك پپتيد ضد ميكروبي غني از سيستيين است كه شكل پيش ساز آن از كبد ترشح مي شود. اين پپتيد عليه دامنه وسيعي از باكتري ها، ويروس ها و قارچ ها عمل مي كند. هپسيدين همچنين به عنوان اصلي ترين تنظيم گر هوميوستاز آهن بدن شناخته شده است. امروزه تلاش هاي گسترده اي براي توليد هپسيدين صورت گرفته است. يكي از سيستم هاي بياني يوكاريوتي مورد استفاده براي توليد هپسيدين ، سيستم بياني باكلوويروس مي باشد. توليد سازه ژني نوتركيب يكي از اصلي ترين مراحل در مسير توليد هپسيدين در اين سيستم بياني است. روش بررسي: ابتدا RNA تام از سلول هاي رده HepG2 به عنوان سلول توليد كننده هپسيدين استخراج شده و پس از سنتز cDNA كل، قطعه مربوط به هپسيدين انساني توسط پرايمر هاي اختصاصي هپسيدين به روش PCR تكثير شد. در مرحله بعد اين قطعه درون ناقل pTZ57R/T كلون شد. در پايان قطعه مربوطه به روش برش آنزيمي توسط آنزيم هاي BamHI و ECoRI به درون محل ورود ژن در ناقل pFast BacHT B منتقل شد. يافته ها: قطعه كد كننده هپسيدين انساني به طور صحيح درون ناقل pTZ57R/T كلون شده و مراحل ساب كلونينگ درون ناقل pFast Bac HT B با موفقيت انجام شد. حضور باند 274 جفت بازي حاصل از تكثير PCR و برش آنزيمي نشان دهنده صحت مراحل انجام كار بود. نتيجه گيري: بر اساس جستجوهاي انجام شده اين مطالعه نخستين مورد از توليد سازه ژني نوتركيب واجد قطعه كد كننده هپسيدين كامل انساني در كشور است. سازه هاي ژني نوتركيب حاصل از اين مطالعه مي تواند به منظور توليد فرم كامل هپسيدين انساني در مطالعات آينده مورد استفاده قرار گيرد. واژه هاي كليدي : سازه ژني، هپسيدين ، آهن

Abstract Background and objective: Hepcidin is a cystein-rich antimicrobial peptide, which is secreted by the liver. It fights against wide spectrum of bacteria, viruses and fungi and it is a major regulator of iron homeostasis. Today, scientists have made many efforts on the production of hepcidin. Baculovirus expression system is one of the best eukaryotic expression systems for production of recombinant hepcidin and production of the recombinant vector is one of the most important steps in this expression system. Material & Methods: First, the total RNA was separated from HepG2 cell line as a source of hepcidin expression. Then, after synthesis of total cDNA, human hepcidin sequence was amplified, using specific primers by PCR method. Next, hepcidin sequence was cloned into pTZ57R/T vector. After digestion of recombinant vector using ECoRI and BamHI restriction enzymes, recombinant pFastBac HT B vector containing human hepcidin cDNA was produced. Results: Coding sequence of human hepcidin is correctly cloned into pTZ57R/T vector and sub cloning into pFastBac HT B vector is performed successfully. The presence of a clear band near 274 bp resulted from PCR amplification and restriction enzyme are the confirmation of the cloning of human hepcidin. Conclusion: According to our knowledge, the present study is the first work that focuses on recombinant vector containing coding sequence of human prohepcidin. This recombinant vector can be used for human hepcidin production. Keywords: Vector; Hepcidin; Iron