بررسي و مقايسه ميزان ايمني زايي پروتيين هاي نوتركيب زير واحد اتصالي توكسين هاي كزاز و بوتولينيوم)تايپ (A

Survey and Comparison of Immunization Scale of The Recombinant Proteins of Attachment Subunit of Tetanus and Botulinom(A) Toxins

چكيده مقدمه: تنها واكسن موجود عليه تتانواسپاسمين(عامل اصلي بيماري كشنده كزاز) توكسوييد آن است كه مصونيت 10 ساله ايجاد مي كند. در حالي كه توكسوييد بوتولينوم(عامل بيماري كشنده بوتوليسم) تنها مصونيت 2 ساله ايجاد مصونيت مي نمايد. اين دو توكسين با 36 درصد همولوژي در يك خانواده قرار دارند اما خاطره ايمني و ميزان پاسخ ايمني هومورال و احتمالاً ميزان توليد آنتي بادي عليه هر كدام متفاوت مي باشد. هدف از مطالعه حاضر اين است كه قطعه C از هر دو توكسين كزاز((THc و بوتولينوم تايپ A (BONT/A-Hc) از نظر ميزان ايمني زايي و تيتر آنتي بادي مورد مقايسه قرار گيرند. مواد و روش ها: بيان پروتيين هاي نوتركيب THc و BONT/A-Hc با استفاده از ميزبانE. coli Bl21 DE3 تراريخته با وكتورهاي pET28a حاوي اين دو ژن در شرايط بهينه انجام گرديد. هر دو پروتيين مذكور از فاز محلول عصاره سلولي استخراج و تخليص شده و بر روي ژلSDS-PAGE مورد بررسي قرار گرفتند. سپس تيتر آنتي بادي موجود در سرم حيوانات ايمن با هر كدام از اين دو پروتيين ، به وسيله تست الايزا مورد ارزيابي و مقايسه قرار گرفت. يافته هاي پژوهش: نتايج ارزيابي ژل SDS-PAGE نشان از بيان و تخليص مناسب هر دو پروتيين نوتركيب، THc و BONT/A-Hc در فاز محلول عصاره سلولي داشت. نتايج الايزاي سرم حيوانات ايمن با اين دو پروتيين نيز نشان داد كه تيتر آنتي بادي عليه پروتيين نوتركيب THc بسيار بالاتر از BONT/A-Hc مي باشد. بحث و نتيجه گيري: به نظر مي رسد اختلاف تيتر آنتي بادي ممكن است با طول عمر سلول هاي خاطره اي هر كدام ارتباط داشته باشد كه نياز به مطالعه بيشتري دارد.

Introduction: The only presented vaccine against tetanospasmin (the main factor of the fatal disease tetanus) is its toxoid which creates a 10-year period immunization. Ho-wever, the botulinum toxoid (the main factor of the fetal disease botulism) only creates a 2-year period immunization. The-se two toxins have 36% homology and are falling into one family but are different in immunological memory, the scale of hom-oral immunity response and probably the scale of antibody production. The goal of this study was to compare the immunization and antibody titer of fragment C of both tetanus toxin (THc) and botulinom type A (BONT/A-Hc). Materials & Methods: Expression of the recombinant proteins, THc and BONT/A-Hc, was accomplished by using of the tran-sgenic host, E.coli Bl21 DE3 and the pET28a vectors which contained the two genes in an optimum condition. Both the mentioned proteins were derived and puri-fied from the solution phase of cell extract and were evaluated on SDS-PAGE gel. Finally, the antibody titer containing in the serum of immunized animals with each of the aforementioned proteins, was inv-estig-ated and compared by immunoassay test. Findings: The result of SDS-PAGE gel evaluation showed a proper expression and purification of both the recombinant prot-eins, THc and BONT/A-Hc, in solution phase of cell extract. The immunoassay res-ults of serum showed that the antibody titer against the recombinant protein of THc was more than those for the recombinant protein of BONT/A-Hc. Discussion & Conclusion: It is conceived that the significant differences in the antib-ody titer can be related to the longevity of memory cells. However, the result needs more studies.