ارزيابي و مقايسه ميزان ايمني زايي پروتيين هاي نوتركيب زير واحد اتصالي توكسين هاي اشرشيا كلي و بوتولينيوم تايپ A

Evaluation and comparison of immunization level between recombinant proteins of binding subunit of entrotoxigenic Escherichia coli and botulinum toxin

زمينه و هدف: در ميان عوامل باكتريايي، شايع ترين عامل بيماري اسهال، باكتري اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك است. زير واحد LTB سم اين باكتري قادر به ايجاد مصونيتي شش ماهه است. كلستريديوم بوتولينوم نيز عامل بيماري كشنده بوتوليسم مي باشد و زير واحد BoNT/A-Hc سم آن مي تواند تا دو سال در برابر اين بيماري مصونيت ايجاد كند. ميزان ايمني زايي كه هر يك از اين زير واحدهاي نوتركيب ايجاد مي كنند، مي تواند از عواملي باشد كه در به وجود آمدن مصونيتي با ماندگاري متفاوت تاثيرگذار باشد. هدف از اين مطالعه بررسي و مقايسه ميزان توليد آنتي بادي ناشي از استفاده از دو پروتيين LTB و BONT/A-Hc در موش آزمايشگاهي بود. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي از باكتري Bl21DE3 E. Coli تراريخت شده با وكتور pET28aاستفاده گرديد. اين وكتور حاوي ژن نوتركيب LTB اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك و ژن نوتركيب BONT/A-Hc بوتولينوم به طور جداگانه بود. پس از بهينه سازي بيان و تخليص پروتيين نوتركيب LTB از فاز نامحلول و BoNT/A-Hc از فاز محلول عصاره سلولي، محصولات آن ها بر روي ژلSDS-PAGE بررسي گرديد. موش هاي آزمايشگاهي به وسيله پروتيين هاي حاصل، ايمني زايي شدند. تيتر آنتي بادي حاصل از هر دو نوع پروتيين نوتركيب با استفاده از آزمون آماري t-Test در نرم افزار SPSS ارزيابي و مورد مقايسه قرار گرفت. يافته ها: پروتيين هاي نوتركيب بيان شده BoNT/A-Hc و LTB با ستون نيكل تخليص شدند. پس از ايمني زايي موش هاي آزمايشگاهي، تفاوت معناداري در تيتر آنتي بادي براي دو پروتيين BoNT/A-Hc و LTB مشاهده گرديد (01/0 > P). نتيجه گيري: اختلاف كمي بين تيتر آنتي بادي براي دو پروتيين BoNT/A-Hc و LTB مشاهده گرديد كه مي تواند به دليل خاصيت قوي ادجوانسيتي LTBو ايمني زايي ايجاد شده تقريباً يكسان، در فاصله زماني محدود باشد.

Background and aims: Among the bacterial agents, the most common cause of diarrheal disease is Entrotoxigenic Escherichia coli. Letal toxin B (LTB) subunit of LT toxin could induce six-month immunity. Clostridium botulinum causes botulism disease. BoNT/A-Hc toxin subunit could induce two years immunity against this disease. It seems that the immunogenicity potency of these two subunits may influence on the memory longevity. The aim of this study is the assessment of LTB and BoNT/A-Hc immunogenicity and investigation of their relations to immunological memory longevity. Methods: In this experimental study the transgenic E. coli BlDE3 with pET28a vector, containing recombinant LTB and BoNT/A-Hc genes separately were used for expression of recombinant proteins. LTB and BoNT/A-Hc expressed as insoluble and soluble forms respectively; and their purity were confirmed on SDS-PAGE gels. Finally, mice immunization were carried out and antibody titration of both recombinant proteins were evaluated and compared using t-Test in SPSS software. Results: After immunization the mice, a difference in antibody titer was observed between two proteins i.e. BoNT/A-Hc and LTB (P < 0.01). Conclusion: There was a significant difference of antibody titration between LTB and BoNT/A-Hc proteins. That can represent a strong adjuvanticity of LTB and almost the same immunogenicity in a limited time.