بررسي و شناسايي ژن هايnuc ، fen B mecA و aac(6)/aph(2)-Ia در استافيلوكوكوس اوريوس هاي ايزوله شده از منطقه شمالغرب ايران با روش Multiplex PCR

Investigation and Identification of the nuc, fem B mecA and aac(6)/aph(2)-Ia Genes in the Staphylococcus Aureus Isolated from Northwest Iran by Multiplex PCR Method

زمينه و اهداف: استافيلوكوكوس اوريوس يك باكتري شايع پيوژنيك است كه داراي قابليت بالقوه براي كسب مقاومت به آنتي بيوتيكهاي جديد مي باشد. ظهور مقاومت به آنتي بيوتيكهاي رايج مانند آمينوگليكوزيدها و ونكومايسين به وضعيت موجود يعني استافيلوكوكوس اوريوس مقاوم به متي سيلين(MRSA) افزوده شده است. آمينوگليكوزيدها از مهمترين عوامل ضد باكتريايي مورد استفاده براي درمان عفونتهاي باكتريايي مي باشند. هدف مطالعه، توسعه Multiplex-PCR براي تشخيص سريع و دقيق همزمان سويه هاي استافيلوكوك اوريوس و ژن هاي مقاومت به آمينوگليكوزيد و متي سيلين مي باشد. مواد و روش ها: ايزوله هاي استافيلوكوكوس اوريوس از نمونه هاي مختلف باليني با استفاده از روشهاي استاندارد باكتري شناسي بدست آمد. الگوي مقاومت آنتي بيوتيكي ايزوله ها، با روش ديسك ديفيوژن تست تعيين گرديد. استخراج ژنوم DNA با روش SDS-Proteinase K همراه با CTAB صورت گرفت. شناسايي ژنهاي nuc،femB ،mecA و aac(6?)/aph(2??)-Ia با استفاده از روش Multiplex-PCR انجام شد. يافته ها: از كل 1389 نمونه باليني ارسالي به آزمايشگاه، تعداد 90 سويه استافيلوكوكوس اوريوس جدا و تعيين هويت شد. نتايج تست حساسيت آنتي بيوتيكي سويه ها، بيانگر بيشترين مقاومت نسبت به پني سيلين (8/97 %) بود. ژنهاي nuc، femBو mecA بترتيب در 100% ، 6/95% و 4/64% سويه ها شناسايي گرديد. همچنين 9/48% سويه ها حامل ژن aac(6?)/aph(2??)-Ia بودند. نتيجه گيري: اين مطالعه نشان داد كه Multiplex PCR نه فقط يك روش مناسب براي تشخيص سريع استافيلوكوك اوريوس مي باشد بلكه حضور ژنهاي مقاوم به آنتي بيوتيكهاي رايج را هم شناسايي مي كند.

Backgrounds and Objectives: Staphylococcus aureus is one of the most common pyogenic bacteria possessing highest potentiality to develop resistance to antibiotics. Emergence of resistance towards the most common antibiotics such as aminoglycoside and vancomycin has added burden to the existing MRSA situation. Aminoglycosides are important bactericidal agents. The aminoglycoside resistance is due to drug inactivation by plasmid- or transposon-mediated aminoglycoside modifying enzymes. The aim of this study was to develop a Multiplex-PCR assay for rapid and accurate detection of S. aureus and its resistance genes to aminoglycoside and methicillin. Materials and Methods: Isolates of S. aureus were obtained from various clinical specimens based on standard bacteriological procedures. The antimicrobial susceptibility of the strains was determined using the disk diffusion method. Extraction of genomic DNA was carried out by SDS-Proteinase K method modified with CTAB. The Multiplex-PCR assay was carried out for detection of mecA, nuc, femB and aac(6?)/aph(2//)-Ia genes. Results: Totally 1,389 specimens examined 90 strains of S. aureus were isolated. Antibiotic susceptibility testing using disc diffusion revealed high resistance to penicillin (97.8%). Among the isolates nuc, femB and mecA genes were detected in 90(100%), 86 (95/6%) and 58 (64/4%) strains, respectively. Additionally, 44 (48/9%) strains were found to harbor aac(6?)/aph(2//)-Ia gene. Conclusion: This study highlights that the multiplex PCR method described herein is not only a convenient method for rapid and accurate detection of S. aureus species but also it detects the presence of common antibiotic -resistant genes.