جداسازي و كلون سازي ژن آنزيم كوتيناز باكتري ترموبيفيدا فوسكا

سابقه و هدف: آنزيم كوتيناز متعلق به خانواده سرين هيدرولازها است و به دليل خواص ساختاري و عملكردي در حذف آلودگي هاي زيست محيطي اهميت بسيار زيادي دارد. هدف از اين پژوهش، جداسازي و كلون سازي ژن آنزيم كوتيناز از باكتري ترموبيفيدا فوسكا (Thermobifida fusca) بود. مواد و روش‌ها: نمونه برداري از خاك هاي جنگلي شمال ايران صورت گرفت. با استفاده از محيط كشت اختصاصي و شرايط محيطي مناسب (10 pH= و دماي 60 درجه سانتيگراد) جداسازي باكتري بومي ترموفيل ترموبيفيديا فوسكا انجام شد. پس از طراحي پرايمر ، ژن كوتيناز (cut1) از باكتري ياد شده جدا گرديد. سپس در وكتور pBluescript sk كلون و به اشريشياكلي DH5α انتقال داده شد. به منظور تاييد كلون سازي، هضم آنزيمي انجام ونمونه ها براي تعيين توالي ارسال گرديد. يافته‌ها: در اين تحقيق براي يافتن آنزيم كوتيناز با ويژگي‌هاي مطلوب تر‌، جداسازي و كلونينگ ژن آنزيم كوتيناز از باكتري ترموفيل بومي ترموبيفيدا فوسكا انجام شد. كلون سازي به كمك روش هضم آنزيمي و تعيين توالي مورد تاييد قرار گرفت. با توجه به نتايج BLAST بيشترين شباهت با 98% همانندي با آنزيم كوتيناز cut1 و 96% شباهت باآنزيم كوتيناز cut-1.KW3 در باكتري ترموبيفيدا فوسكا مشاهده گرديد. نتيجه گيري: با استفاده از آنزيم كوتيناز كلون شده در اين تحقيق و با توجه به طيف وسيع عملكردي آن در برابر سوبستراهاي متنوع و قابليت تجزيه و سنتز انواع تركيبات پلي استري، اين آنزيم مي‌تواند در رفع آلودگي‌هاي زيست محيطي نقش مهمي ايفا كند.