كلونينگ مولكولي ساب‏يونيت‌هاي آلفا و بتاي هورمون لوتيينيزه با استفاده از تواليIRES در شاتل وكتورPEGFP-N1 و تطابق آن با بانك ژني

Molecular cloning and blast by gene bank of alpha and beta subunit in LH hormone into mammalian shuttle vectorPEGFP-N1 using IRES

مقدمه و هدف:هورمون‌هاي گليكوپروتييني ترشح‏شده از هيپوفيز قدامي از دو زيرواحد آلفا و بتا با اتصال غيركوالان تشكيل‏شده‏است، زيرواحد الفا در هورمون‌هاي اين خانواده يكسان است و تفاوت در فعاليت بيولوژيك اين دسته ازهورمون‌ها به زيرواحد بتاي آنها ارتباط‏دارد. با توجه به عدم دسترسي مناسب به هورمون و امكان ايجاد آلودگي، در اين تحقيق تلاش‏شد تا با استفاده از تواليIRES زيرواحدهاي آلفا و بتاي اين ژن به‏منظور استفاده درماني، در پلاسميد بيانيpEGFP-N1كلون شود. مواد و روش‌ها:تحقيق با طراحي تجربي انجام‏گرفت،به‏منظور كلونينگ زير واحدهاي آلفا و بتاي هورمون LH، ابتدا توالي نوكلوتيدي طراحي‏شده در پلاسميد حامل pGEM-BIسنتز شد. توالي مورد نظر در سايت SmaI پلاسميدبياني pEGFP-N1،ساب‏كلون شد. پلاسميد حاصل با انجام هضم آنزيمي و PCR،مورد تاييد قرارگرفت. نتايج:آناليزآنزيميو PCRنشان‏داد كه پلاسميد-?-IRES-B pEGFP-Nl، حاوي توالي صحيحي بوده، با توالي ژن مورد نظر در بانك ژن تطابق‏دارد. نتيجه‏گيري:اين پلاسميدبه دليل ساختارصحيح براي انتقال به سيستم يوكاريوتيوارزيابي بيان،مناسب است.

Background and Objective: The glycoprotein hormone secreted from anterior pituitary gland are heterodimeric, non- covalently consisting of a common ? subunit and a hormone-specific B subunit. Due to the lack of adequate access to hormones and the possibility of contamination, this study attempted to clone two subunits of LH hormone by using IRES sequence in eukaryotic expression vector pEGFP-NI for clinical purposes. Materials and Methods: To clone the LH hormone, we designed the subunits alpha and beta sequences, then synthesized the plasmid vector pGEM-BI. The designed sequence was subcloned in the SmaI site of expression plasmid pEGFP-N1. The resulting plasmid was confirmed by restriction enzyme digestion and PCR. Results: PCR and restriction enzyme analysis showed that the plasmid pEGFP-Nl-?-IRES-B contains the correct sequence of the target gene sequences in the gene bank. Conclusion: Since the plasmid has a proper structure, it can be used to transfer into eukaryotic systems and is also appropriate for the evaluation of expression.