بهينه سازي محصول PCRتوالي پروموترغني ازG+C ژن انساني Astrocyte elevated gene -1

Optimization PCR product of GC rich astrocytedelevated gene 1 promoter

زمينه و هدف: اكثر ژن هاي خانه دار، سركوبگر تومور، و تقريبا 40% ژن هاي اختصاصي بافت ها حاوي توالي غني از G+C در نواحي پروموتري خود مي باشند كه تكثير آن با مشكلات زيادي همراه است. ژنAstrocyte elevated gene -1(AEG-1) داراي نقش عملكردي در چندين مرحله از پيشرفت تومور از جمله، ترانسفورماسيون، آپوپتوزيس، متاستاز، مقاومت به شيمي درماني، رگزايي و پيري سلول مي باشد. مواد و روش كار: اين مطالعه، به بهينه سازي واكنش زنجيره اي پليمر از (PCR) براي تكثير موفق bp 495 از پروموتر ژن AEG-1، داراي محتوي > 70%G+C و جايگاه اتصال چندين فاكتور رونويسي در بيماران مبتلا به هپاتوسلولار كارسينوما پرداخته است. يافته ها: يافته ها نشان مي دهد استفاده از CO-Amplification، DMSO به همراه برنامه Touch down PCR و آنزيم pfu در تخريب ساختارهاي ثانويه توالي هاي DNA و افزايش محصول واكنش موثر مي باشد. نتيجه گيري: اين روش مي تواند براي تكثير ديگر نواحي غني از G+C نيز مورد استفاده قرار گيرد.

Background and Objectives: Most housekeeping genes, tumor-suppressor genes, and approx 40% of tissue specific genes contain G+C sequences in their promoter region that are very difficult to amplify. AEG-1 plays a signi?cant role in invasion, metastasis, angiogenesis and chemoresistance, apoptosis, angiogenesis and aging Material and Methods:In this study, we proposed an improved polymerase chain reaction (PCR) method to be used for successful amplification of the Astrocyte elevated gene -1gene promoter region that contains > 70% G+C content in a sequence of 495 bp and some transcription initiation sites in hepatocellularcarcinoma patient. Results: The results showed that using of DMSO co-amplification; touchdown PCR and pfu enzyme can inhibit the formation of secondary structure in DNA Sequences and increase the PCR product. Conclusion: Therefore, this method can be recommended to amplify other GC-rich genomic templates.