مطالعه تنوع ژنتيكي و شجره شناسي قطعه ثابت زنجيره سنگين ايمونوگلوبولين Y (IgY) در توده مرغ هاي بومي خراسان

Genetic Diversity and Phylogenetic Analysis of the Constant Region of Immunoglobulin Y Heavy Chains in Khorasan Native Chicken

در سال هاي اخير ايمونوگلوبولين Y به عنوان يك آنتي بادي پلي كلونال كاربرد زيادي در تحقيقات پزشكي، ژنتيك و علوم دامي داشته است. اين ايمونوگلوبين داراي دو شاخه سبك و سنگين است. شاخه سنگين ايمنوگلوبولين Y درپرندگان يك ناحيه متغير و 5 ناحيه ثابت را دارا مي باشد. ساختمان ناحيه ثابت مشخصه يك كلاس يا زير كلاس ايمونوگلوبولين ها مي باشد. هدف از اين مطالعه بررسي تنوع ژنتيكي و آناليز شجره شناسي ژن كد كننده قطعه ثابت شاخه سنگين ايمونوگلوبولين Y در مرغ هاي بومي خراسان در سطح mRNA مي باشد بدين منظور از 20 قطعه مرغ بومي خراسان نمونه طحال جمع آوري گرديد. پس از استخراج RNA و توليد cDNA از طريق رونويسي معكوس، تكثير قطعه 1205 جفت بازي ناحيه ثابت IgY توسط آغازگرهاي اختصاصي و با استفاده از واكنش زنجيره اي پلي مراز انجام پذيرفت. سپس به توالي يابي قطعات اقدام شد بعد از توالي يابي و آناليز داده هاي حاصل، تعداد 5 هاپلوتيپ براي توالي ها مشخص گرديد. نتايج شجره شناسي نشان داد، كه مرغ بومي خراسان در بين گونه هايي كه داراي اين نوع ايمنوگلوبولين هستند داراي كمترين فاصله ژنتيكي با مرغ لگهورن سفيد و مرغ بومي آذربايجان مي باشد. همچنين از مجموع 9 جهشي كه اين توالي در سطح RNA نسبت به توالي مرجع داشت فقط 5 جهش باعث تغيير در اسيد آمينه شد.

In recent years, immunoglobulin Y is used in medical, genetic and animal research as a polyclonal antibody. Immunoglobulin Y has both heavy and light chains. The heavy chain in birds has one variable region and 5 constant regions. The constant region structure determines the class or subclass of the immunoglobulin. The aim of this study was to investigate the genetic diversity and phylogenetic analysis of the gene encoding the constant fragment of the immunoglobulin Y heavy chain in Khorasan native chicken. For this purpose, 20 samples were collected randomly from Khorasan native chicken spleen. After RNA extraction, cDNA synthesis was performed by reverse transcription. A 1205 bp fragment of the constant region of IgY was amplified by PCR using specific primers. After sequencing, 5 haplotypes were identified. Phylogenetic results demonstrated that Khorasan native chicken had the lowest genetic distance with white Leghorn chicken and Azarbaijan native chicken. Totally, there were 9 mutations at the RNA level but only five mutations caused a change in the amino acid.