بررسي و مقايسه ميزان ايمني زايي پروتيين هاي نوتركيب زير واحدهاي اتصالي نوروتوكسين تتاني و توكسين حساس به حرارت اشريشياكلي و ارتباط آن با خاطره ايمني

Evaluating and Comparing Immunization Level of the RecombinantProteins, Binding Domain of Tetanus Neurotoxin and B Subnnit of Heat Labile Toxin of Escherichia coli, and their Relation to Immunological

چكيده مقدمه: توكسين حساس به حرارت(LT) از عوامل حدت زاي باكتري اشريشياكلي انتروتوكسيژنيك است. زير واحد LTB، قسمت اتصال دهنده توكسين و قادر به ايجاد مصونيتي شش ماهه در انسان است. توكسين كلستريديوم تتاني عامل بيماري كشنده كزاز است و توكسوييد آن مصونيتي ده ساله در انسان ايجاد مي نمايد. زير واحد Hc قسمت اتصال دهنده و ايمونوژنيك توكسين كزاز مي باشد. ميزان ايمني زايي كه هر يك از زير واحدهاي نوتركيب THc و LTB ايجاد مي كنند، مي تواند از عواملي باشد كه در به وجود آمدن مصونيتي با ماندگاري متفاوت تاثيرگذار باشد. هدف از اين مطالعه ارزيابي و مقايسه ميزان ايمني زايي دو پروتيين نوتركيب LTB و THc در مدل حيواني و بررسي ارتباط آن با مدت مصونيت مي باشد. مواد و روش ها: بيان پروتيين هاي نوتركيب THc و LTB با استفاده از ميزبانE.coli Bl21 DE3 تراريخته با وكتورهاي pET28a حاوي اين دو ژن در شرايط بهينه انجام شد. پس از بيان در شرايط بهينه، LTB از فاز نامحلول و THc از فاز محلول تخليص و خلوص آن بر روي ژل SDS-PAGE بررسي گرديد. جهت بررسي ايمني زايي، اين دو پروتيين به موش تزريق گرديد. تيتر آنتي بادي حاصل با الايزا ارزيابي شده و مورد مقايسه قرار گرفت. يافته هاي پژوهش: نتايج ژل SDS-PAGE، بيان زياد هر دو پروتيين را نشان مي داد. نتايج بررسي ايمني زايي با اين دو پروتيين نوتركيب نشان داد كه در شرايط يكسان ايمني زايي، زير واحد THc تيتر آنتي بادي بالاتري نسبت به زير واحد LTB دارد. بحث و نتيجه گيري: تيتر آنتي بادي بالا، گام اول در ايجاد خاطره ايمني قوي و ماندگار است. بنا بر اين تفاوت در تيتر آنتي بادي ممكن است با طول عمر سلول هاي خاطره اي موش هاي ايمن شده با هر يك از اين دو پروتيين نوتركيب ارتباط داشته باشد.

Introduction: Heat labile toxin (LT) is one of the virulence factors of Enterotoxigenic Escherichia coli. B subunit of LT (LHB) is the binding subunit and can induce six months immunity in humans. Tetanus toxin of Clostridium Tetani causes the fatal disease, tetanus. This toxoid induces two years immunity in humans. Hc subunit, as binding domain of the toxoid is considered as immunogenic part of tetanus toxin. The THc and LTB recombinant subunits have the potential role to induce immunological memories with different longevity. The purpose of this study was to evaluate and compare the immunogenicity of THc and LTB recombinant proteins in animal model and also to evaluate their roles in immunity duration. Materials & methods: The recombinant proteins, THc and LTB, were expressed in the transgenic host, E.Coli Bl21 DE3 using pET28a vector containing their respected genes in optimum condition. After express-ion, LTB and THc were purified from insoluble and soluble phases, respectively. Then, their purity was confirmed by SDS-PAGE gel. To evaluate their immuno-genicity, these proteins were injected into mice and the antibody titer were evaluated and compared by ELISA technique. Findings: SDS-PAGE results showed overexpressed levels of the proteins under study.Immunity assessment revealed that in the same condition of immunity the THc subunit produces a higher antibody titer in comparison with the LTB subunit. ِDiscussion & Conclusion: The first step in creating a strong and long-lasting immune-ological memory is the induction of high titer of antibody. Thus, the difference in antibody titer may be related to memory cells lifetime in the immunized mice.