بررسي اثر مليتين بر ميزان بيان پروتيين Rac1 به عنوان ماركر متاستاز در سلول‌هاي سرطان معده رده AGS

The Effect of Melittin on Rac1 Protein Expression as a Metastatic Factor in AGS Gastric Cancer Cell Lines

مقدمه: شناخت مكانيسم‌هاي مولكولي در متاستاز براي طراحي و استفاده موثر از استراتژي‌هاي درماني جديد ضروري مي‌باشد. يك دسته از مولكول‌هايي كه در اين مكانيسم نقش داردند Rac1 است. با توجه به عوارض جانبي روش‌هاي درماني رايج مانند شيمي درماني، امروزه توجه زيادي به تركيبات طبيعي شده است كه داراي اثرات جانبي كمتر و خواص ضدسرطاني هستند. مليتين يك پپتيد آمفي پاتيك مشتق شده از سم زنبور عسل مي‌باشد. مطالعات نشان دادند كه مليتين با تاثير بر ميزان بيان Rac1 نقش مهمي در كاهش متاستاز سلول‌هاي سرطاني دارد. در اين مطالعه به بررسي تاثير مليتين بر ميزان بيان پروتيين Rac1در سلول‌هاي سرطان معده رده AGS پرداخته شده است. روش بررسي: سلول‌هاي AGS بعد از رشد و رسيدن به تراكم بيش از 80 درصد، به مدت 6 ساعت با غلظت‌هاي 2/0، 3/0، 4/0 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر مليتين تيمار شدند. پس از جمع‌آوري و ليز سلول‌ها با بافر ليز، ميزان بيان پروتيين Rac1 در مقايسه با كنترل به روش وسترن بلاتينگ سنجيده شد. اطلاعات به دست آمده با كنترل B-Actin مقايسه و به صورت درصد محاسبه گرديد. داده‌ها با استفاده از نرم افزار آماري SPSS و آزمون Anova One-Way تجزيه و تحليل شد. نتايج: بيان پروتيين Rac1 در حضور غلظت‌هاي 2/0 (5/5±109) و 3/0 (6/3±105) مليتين نسبت به كنترل (100) افزايش و غلظت 4/0 (2±100) شبيه به كنترل شد كه تفاوت معني‌داري ديده نشد (05/0 < p). نتيجه‌گيري: با توجه به نتايج به دست آمده مليتين در اين مطالعه تاثيري بر بيان Rac1 در سلول‌هاي سرطاني معده رده AGS ندارد.

Introduction: Understanding the molecular mechanisms of metastasis is important for the design and effective use of novel therapeutic strategies in order to combat metastases. One class of molecules that has been implicated in metastasis is Rac1. Regarding complications of conventional therapies such as chemotherapy, current studies are evaluating natural compounds with anticancer Properties. Melittin is a natural compound derived from honey bee venom which has revealed amphipatic properties. Some studies have shown that melittin has an important role in reducing cancer cells metastasis by affecting Rac1 expression. Since the studies on melittin role in regard to Rac1 in gastric cancer cells are rare, the present study examined the effect of melittin on Rac1 protein expression in AGS gastric cancer cells. Methods: AGS cells, after growth and reaching to 80% density, were exposed to 0.2, 0.3, 0.4 ?g/ml concentrations of melittin (test groups) for six hours. Then cells were collected, lysed with lysis buffer and Rac1 protein was identified by Western blotting technique. Data were normalized with the B-Actin internal control and calculated as the relative percentage. The study data were analyzed using SPSS statistical software via One-Way Anova test. Results: Comparison of Rac1 expression levels in AGS cancer cells showed that cells which were exposed to 6 hours of 0.2?g/ml (109±5.5), 0.3(105±3.6) melittin had higher Rac1 expression percentages compared to the control (100) and 0.4 (100±2). Rac1 expression percentages were not significant with a confidence interval (CI) of 95% ( P > 0.05 ). Conclusion: In this study the results demonstrated that melittin does not have any effect on Rac1 in gastric cancer cells (AGS).