شناسايي ژن‏هاي حدت ‏yrp1 و yrpE در باكتري يرسينيا راكري به روش PCR در استان چهارمحال و بختياري

Detection of virulence genes (yrp1 and yrpE) in the Yersinia ruckeri by polymerase chain reaction test in Chaharmahal-Va-Bakhtiary province, Iran

مقدمه: يرسينيا راكري عامل بيماري دهان قرمز آنتروباكتريايي و از بيماري‏هاي مهم آزاد ماهيان پرورشي است. ‏مطالعه حاضر با هدف شناسايي ژن‏هاي حدت yrp1 و yrpE در باكتري يرسينيا راكري انجام شد. مواد و روش‏‏ها: به منظور انجام اين تحقيق، ‏ماهيان 10تا 12 سانتي‏متري 6 مزرعه پرورش ماهي استان چهارمحال و بختياري، بررسي باكتري‏شناسي شدند. ‏به طوري‏كه از هر مزرعه 10 عدد ماهي مشكوك به بيماري ‏(‏در مجموع 60 عدد) به طور تصادفي انتخاب و نمونه برداري از انتهاي روده آن‏ها، كشت بر روي محيط‏هاي غني كننده (‏تريپتيكاز سوي آگار) و اختصاصي ‏(‏واتمن- شاتس) ‏يرسينيا راكري انجام شد‏. ‏سپس سويه‏هاي مثبت باكتري يرسينيا راكري با آزمايش PCR شناسايي شد. ‏در مرحله بعد بر روي باكتري‏هاي شناسايي شده با استفاده از زوج پرايمرهاي مربوط به دو ژن حدت به نام‏هاي yrp1 و yrpE آزمون PCR انجام شد. نتايج: از تعداد كل نمونه‏هاي باكتريايي 24 سويه به عنوان باكتري يرسينيا راكري شناسايي شدند كه در بين آن‏ها 12 سويه ‏(‏50 درصد) حامل ژن yrp1 و 11 سويه ‏(‏83/45 درصد) حامل ژن yrpE بودند. ‏به طور هم‏زمان نيز 6 سويه ‏(‏25 درصد) هر دو ژن را داشته اند. بحث و نتيجه‏گيري: نتايج تحقيق حاضر نشان از وجود عامل‏‏هاي حدت yrp1 و yrpE در سويه‏هاي يرسينيا راكري جدا شده دارد. ‏yrp1 به عنوان پروتياز خارج سلولي شناخته شده يرسينيا راكري بوده و نقش مهمي در حدت و بيماري‏زايي اين باكتري دارد.

Introduction: Yersinia ruckeri is the etiological agent of enteric redmouth (ERM) disease, one of the important bacterial diseases in the cultured salmonids. The aim of present study was detection of virulence genes (yrpE and yrp1) in the Y.ruckeri bacterium Materials and methods In this study fish were evaluated in average size 10-12 Cm from six rainbow trout farms in Chaharmahal-Va-Bakhtiary province. In each farm 10 fish (totally 60) suspected to ERM were randomly selected, sampling was done from lower part of intestine and cultured on general (trypticase soy agar) and specific (Waltman-Shots) mediums. Finally, colonies that were isolated on these mediums tested by PCR method for Y.ruckeri detection. Then, in the identified strains of Y.ruckeri virulenc genes (yrp1and yrpE) were detected by PCR test. Results: In the all strains of Y.ruckeri two virulence genes (yrp1and yrpE) were identified by molecular test. 24 strains out of total isolates were identified as Y.ruckeri, and among them 12 cases (50%) and 11 cases (45.83%) had yrp1 andyrpE genes, respectively. Also, 6 samples (25%) had both genes simultaneously. Discussion and conclusion: The study revealed that virulence factor yrp1 is as extracellular protease presence in Y.ruckeri strains. This factor plays an important role in the bacterial virulence and pathogenesis of ERM disease. Data obtained in this study help to control disease especially in development of current vaccines. Key words: Rainbow trout, PCR, Yersinia ruckeri, yrp1, yrpE