بررسي اثر جهش‌زايي عصاره‌ي متانولي گياه گل گاوزبان (Echium amuenum) با تست ايمز (Ames bioassay)

Assessing Mutagenicity of Methanolic Exteract of Borage Flower (Echium amuenum) Using Ames Bioassay

زمينه: گياه گل گاوزبان (Echium amuenum) داراي آلكالوييدهاي پيروليزيدين با اثرات شناخته شده سميت كبدي و موتاژنيسيته مي‎باشد. بر همين اساس در اين تحقيق اثرات جهش‌زايي احتمالي عصاره‌ي متانولي سر شاخه‌هاي گلدار آن، با استفاده از تست ايمز بررسي شد. مواد و روش‌ها: عصاره‌گيري با روش خيساندن در متانول به مدت 48 ساعت انجام شد. عصاره گياه از نظر آلودگي به آفلاتوكسين B1 و حضور اسيدآمينه هيستيدين به‌روش TLC مورد ارزيابي قرار گرفت. MIC (minimum inhibitory concentration) كمترين غلظت مهار رشد ميكروبي) با روش رقت لوله‌اي تعيين شد. براي بررسي اثرات جهش‌زايي، از آزمون ايمز با استفاده از سويه‌ي سالمونلا تيفي موريم 100TA، استفاده شد. ژنوتيپ سويه با استفاده از فاكتورهاي عدم سنتز هيستيدين، حضور فاكتور R، موتاسيون rfa و موتاسيون uvrB تاييد شد. در اين تحقيق از 4 غلظت 25/0، 5/0، 75/0 و 1 ميلي‌گرم بر ميلي‌ليتر (غلظت‌هاي كمتر از 1/0 MIC گل گاوزبان) كنترل مثبت (سديم آزيد) و كنترل منفي (متانول) در حضور و عدم حضور آنزيم‌هاي كبدي استفاده شد. يافته‌ها: در 4 غلظت بررسي، تغيير معني‌داري در كلني برگشتي نسبت به كنترل منفي مشاهده نشد. همچنين در حضور آنزيم‌هاي كبدي، تغيير معني‌داري در تعداد كلني‌ها مشاهده نشد. نتيجه‌گيري: با توجه به نتايج، به‌نظر مي‌رسد كه اين گياه پرمصرف در طب سنتي، فاقد اثر موتاژنيك و نيز سميت ژني در مقادير معمول مصرف است.

Background: pyrrolizidine alkaloids have been isolated from Echium amuenum. These alkaloids knowing as hepatotoxic, damage the liver. Mutagenicity of pure pyrrolizidine alkaloids has been identified. Thus, the mutagenic effect of the methanolic flower extract was tested using Amest test. Materials and Methods: The long maceration process (for 48 hrs) is carried out in order to extract all constitutes. Thin layer chromatography (TLC) method was used to evaluate aflatoxin B1 contamination and histidine amino acid presence. Minimum inhibitory concentration (MIC) was determined with the dilution method. Salmonella typhimurium strain TA100 was used to determination of mutagenicity. The genotype was confirmed by using histidine requirement, R- factor presence, rfa and uvrB mutations tests. The mutagenicity assay was performed by four extract concentrations (0.25, 0.5, 0.75 and 1mg/ml). Sodium azide (NaN3) and methanol were used as the mutagens (positive control) and negative control, respectively in the absence or presence of liver-metabolizing enzymes. Results: The data indicate that Echium amuenum has not significant mutagenic activity against negative control. The presence of liver-metabolizing enzymes did not exhibit a significant change against the properties of extract. Conclusion: It seems that this extensive used plant in traditional medicine, doesn’t contain mutagenic or genotoxic effect in usual doses.