بررسي اثر ضد ويروسي عصاره متانولي ريشه گياه شيرين بيان بر روي هرپس سيمپلكس نوع يك با استفاده از روش كشت سلولي

The Evaluation of Methanolic Extract of Glycyrrhiza Glabra Effect on the Replication of Herpes Simplex Virus Type 1 in Vero Cell Line

مقدمه و هدف: تاثيرات جانبي داروها و همچنين ايجاد مقاومت دارويي نسبت به آنها از عوامل گرايش محققين به سمت گياهان دارويي مي باشد. هدف اصلي اين مطالعه تعيين اثرات محتمل ضد ويروسي عصاره متانولي ريشه شيرين بيان بر ضد ويروس هرپس سيمپلكس نوع 1 در محيط كشت سلولي و با كاربرد متد TCID50 (50%Tissue Culture Infective Dose) بوده است. روش كار: در اين مطالعه تجربي جهت به دست آوردن غلظت مناسب عصاره براي سلولهاي Vero ، رقتهاي مختلف عصاره متانولي در آزمون نوترال رد بررسي شد. پيش تيمار سلولها با عصاره شيرين بيان ، تيمار مستقيم ويروس با عصاره و نيز تيمار سلولها با عصاره شيرين بيان 1 ، 4 ، 8 ، 12 و 24ساعت پس از آلوده نمودن سلولها با ويروس انجام گرفت و جهت بررسي ميزان عفونت زايي ويروس در هر مرحله آزمون TCID50 انجام گرفت. نتايج به دست آمده پس از آنكه تمام آزمونها سه بار تكرار شد مورد بررسي قرار گرفتند. نتايج: پيش تيمار سلولها با عصاره به مدت 2 ساعت و انكوباسيون ويروس با عصاره به مدت 1 ساعت و 2 ساعت قبل از آلوده نمودن سلولها ميزان TCID50 ويروس را در مقايسه با كنترل كاهش داد و ميزان كاهش از لحاظ آماري و با توجه به مقدار احتمال به دست آمده معني دار بود (P < 0.001). در آزمونهايي كه عصاره 1 ، 8 و 12 ساعت پس از آلوده نمودن سلولها با ويروس اضافه گرديد نسبت به حالت كنترل Log TCID50يك لگاريتم كاهش يافت و ميزان كاهش عفونت زايي از لحاظ آماري معني دار بود. مقايسه روابط درون گروهي ميان گروههاي مختلف زماني نشان داد كه ميزان تغيير Log TCID50 تحت تاثير عصاره متانولي شيرين بيان در حالتي كه گروههاي 1 و 4 ساعت ، 1 و 24 ساعت ، 4 و 8 ساعت، 4 و 12 ساعت، 8 و 24 ساعت و 12 و 24 ساعت با يكديگر مقايسه شدند ، داراي تفاوت معني دار ميباشد (P < 0.001). نتيجه نهايي: مطالعه حاضر منجر به حصول نتايج جديدي در زمينه تاثيرات ضد ويروسي عصاره متانولي شيرين بيان از جمله تاييد نقش زمان تاثيرگذاري عصاره بر ميزان TCID50 ويروس گرديد. از سوي ديگر پيش تيمار ويروس با عصاره متانولي شيرين بيان و نيز پيش تيمار سلولها با عصاره، قبل از آلوده نمودن آنها با ويروس تاثير ضد ويروسي اين عصاره بر عليه ويروس هرپس سيمپلكس تيپ 1 را نشان داد.

Introduction & Objective: The side effects of drug consumption and also HSV resistance to drugs have been the factors attracting the researchers to herbal drugs. The major aim of the present research was in vitro assessment of possible anti-herpetic activity of glycyrrhiza glabra (liquorices root) methanolic extract in more details by performing Tissue Culture Infective Dose fifty percent (TCID50) method. Materials & Methods: In this experimental study Vero cells were incubated with different con-centrations of methanolic extracts of glycyrrhiza glabra .Neutral red assay was performed in order to consider the appropriate concentration of the extract. Pre-treatment of Vero cells with glycyrrhiza glabra extract before viral infection, incubation of HSV-1 with glycyrrhiza glabra extract and treatment of vero cells with extract 1, 4, 8, 12 and 24 hours after viral infection, were exerted. TCID50 was performed in order to assess the antiviral activity of the extract. The results were analyzed after performing the experiments at least three times. Results: Pre-treatment of Vero cells with methanolic extract for two hours and incubation of virus with extract for one and two hours prior to viral infection resulted in remarkable drop in TCID50 amount by significant difference (P < 0.001). Treatment of Vero cells with extract 1, 8 and 12 hours post-infection demonstrated significant changes in TCID50. We observed significant fluctuations and different efficacy of the extract between different incubation time at 1h & 4h, 1h & 24h, 4h & 8h, 4h & 12h, 8h & 24h, 12h & 24h. Conclusion: The current study resulted in more novel findings of anti herpetic activity of gly-cyrrhiza glabra extract. Time course of extract treatment with virus- infected cells was an ef-ficient factor. In addition, the pretreatment of virus and also Vero cells with glycyrrhiza glabra extract in our experiment had important effects on the anti-viral activity of the extract. (Sci J Hamadan Univ Med Sci 2014; 20 (4):325-332)