تاثير كرايوپرزرويشن و انجماد خشك در كشت سلول‌هاي اندوتليال بر روي پرده آمنيون انساني

THE EFFECTS OF CRYOPRESERVATION AND LYOPHILIZATION ON ENDOTHELIAL CELLS ADHESION TO HUMAN AMNIOTIC MEMBRANE

پيش زمينه و هدف: پرده آمنيون انساني داراي ويژگي‌هايي است كه آن را بيومتريال مناسبي جهت استفاده در مهندسي بافت عروق مي‌سازد. در اين مطالعه پرده آمنيون با روش‌هاي مختلف نگهداري شد و اثرات روش‌هاي نگهداري بر روي تركيبات ماتريكس خارج سلولي آمنيون و چسبندگي سلول‌هاي اندو تليال كشت داده شده بر روي آن با نمونه‌هاي تازه تهيه شده بررسي گرديد. روش بررسي: پرده آمنيون انساني پس از تهيه با روش‌هاي كرايوپرزرويشن (در دماي C°80- به مدت 12 ماه) و انجماد خشك (ليوفليزاسيون) نگهداري شد و تركيبات ماتريكس خارج سلولي توسط رنگ آميزي ايمونوهيستوشيمي ارزيابي و ميزان چسبندگي سلول‌هاي اندوتليال كشت داده شده بر روي آن با روش MTT بررسي گرديد. مقايسه نتايج توسط آناليز آماري ANOVA صورت پذيرفت. يافته‌ها: نتايج نشان داد كه ساختمان بافتي از نظر تركيبات ماتريكس خارج سلولي در نمونه‌هاي كرايوپرزرو شده با نمونه‌هاي تازه تهيه شده يكسان است ولي تغييراتي در ساختار نمونه‌هاي ليوفليزه شامل آسيب و بهم ريختگي لايه رتيكولار وجود دارد. ميزان چسبندگي سلول‌هاي اندوتليال در نمونه‌هاي ليوفليزه بيشتر از نمونه‌هاي كرايوپرزرو شده و تازه تهيه شده مي‌باشد (P < 0.05). نتيجه گيري: كرايوپرزرويشن و ليوفليزاسيون پرده آمنيون انساني، مي‌توانند تاثيراتي در ماتريكس خارج سلولي آن داشته باشد و اين امر چسبندگي سلول‌هاي اندوتليال به آمنيون را تحت تاثير قرار مي‌دهد. پرده آمنيون ليوفليزه بستر مناسب تري براي كشت سلول‌هاي اندوتليال در مهندسي بافت عروق مي‌باشد.

appropriate biomaterial for using in vascular tissue engineering. In this study, amniotic membrane was preserved with different methods. Effects of preservation on amniotic extracellular matrix and adhesion of cultured endothelial cells to membrane were compared with fresh samples of amniotic membrane. Materials & Methods: Human amniotic membrane was preserved with cryopreservation (-80 ?C for 12 month) or lyophilization methods. Extracellular matrix components were assayed with immunohistochemistry method. The adhesion of cultured endothelial cells was studied with MTT assay. Results between groups were compared with ANOVA (Post-test Tukey). Results: Results demonstrated that extracellular matrix components were same in cryopreserved samples in comparison to fresh ones but there are some differences in lyophilized samples. Adhesion of endothelial cells to lyophilized samples was significantly more than cryopreserved or fresh samples (P Value < 0.05). Conclusion: Both cryopreservation and lyophilization affect extracellular matrix of human amniotic membrane which can determine the rate of the adhesion of endothelial cells to amniotic membrane. Lyophilized amniotic membrane is a better choice for culture of endothelial cells in vascular tissue engineering. Keywords: Amnion, Cryopreservation, Lyophilization, Endothelial cells, Adhesion, Extracellular