جهش‏زا‏‏يي توسط UV و اسيد نيترو براي افزايش توليد رنت در Rhizomucor miehei

Mutagenesis by UV and Nitrous Acid for increase of rennet production in Rhizomucor miehei

مقدمه: در اين تحقيق، تكنيك جهش و انتخاب، براي افزايش توليد رنت ‏(‏آنزيم دلمه كننده شير) ‏در ريزوموكور ميه هي استفاده شد. جهش و انتخاب، تكنيكي براي اصلاح سويه‏ها‏ي ميكروبي است ‏كه طي آن، با استفاده از عوامل جهش‏زا‏‏ در ارگانيسم مورد نظر جهش ايجاد شده، سپس، جهش يافته‏ها‏ي مطلوب با يك استراتژي مشخص انتخاب مي‏‏‏شوند‏‏. مواد و روش‏‏ها: در ابتدا تعدادي جهش يافته با كاربرد دوزهاي ‏بهينه از UV ‏(‏به عنوان جهش‏زا‏‏ي فيزيكي) ‏و اسيد نيترو ‏(‏به عنوان جهش‏زا‏‏ي شيميايي) ‏به شكل‏‏ تصادفي ايجاد شد. سپس، از ميان جهش يافته‏ها‏ي به دست آمده، بهترين سويه‏ها‏ از نظر توليد، انتخاب شده و از نظر فعاليت دلمه كنندگي، فعاليت پروتيوليتيكي، سينتيك توليد آنزيم، نسبت C/P ‏(‏نسبت فعاليت دلمه كنندگي به فعاليت پروتيوليتيكي)‏، بازدهي، بهره‏وري‏‏ و ضريب رشد ويژه، با سويه والد در 5 تكرار مقايسه شدند. نتايج: در اين تحقيق فعاليت دلمه كنندگي رنت حاصل از سويه والد، SU.mL-1 1183 تعيين شد‏‏. همچنين، جهش يافته‏ها‏يي با نام‏ها‏ي انتخابي U-1113 و ‏N-0227 ايجاد شد كه به ترتيب قادر به توليد 1771 و SU.mL-1 1864 رنت بودند. نسبت ‏C/P در مورد رنت سويه والد ‏4950 و در مورد جهش يافته‏ها‏ي U-1113 و ‏N-0227 به ترتيب 8114 و SU.PU-1 ‏8193 به دست آمد. بحث و نتيجه‏گيري: فعاليت آنزيم در جهش يافته‏ها‏ي U-1113 و ‏N-0227 نسبت به سويه والد، به ترتيب 7/49 و 6/57 درصد افزايش داشت ‏(‏05/0P value < ). همچنين، ميزان بهره‏وري‏‏، بازدهي و نسبت ‏C/P، به طور معني‏داري نسبت به سويه والد بهبود يافت ‏(‏05/0P value < )؛ ‏كه نشان مي‏‏‏دهد جهش‏زا‏‏هاي مورد استفاده بر كيفيت و كميت رنت سويه ياد شده‏‏ موثر بوده است.

Introduction: In this study, Mutation and Selection technique was used to increase production of Rennet (milk clotting enzyme) in Rhizomucor miehei. Mutation and Selection is a technique for microbial strain improvement in which, mutation is induced on an organism by mutagen factors, then superior mutants are selected by screening procedures. Materials and methods Mutations were induced by an optimized dose of UV (as physical mutagen) and Nitrous acid (as chemical mutagen). Superior mutants were selected and compared to the parent strain regarding the clotting activity, proteolytic activity, enzyme production kinetic, yield, productivity and special growth rate in 5 replications. Results: The milk clotting activity of parent strain was 1183 SU.mL-1. Mutants designated U-1113 and N-0227 were isolated which, produced 1771 and 1864 respectively. C/P ratio was measured 4950, 8114 and 8193 SU.PU-1 in parent, U-1113 and N-0227, respectively. Discussion and conclusion: Production of enzymes in mutants U-1113 and N-0227 were increased 49.7 and 57.6% respectively, relative to parent strain. Yield of production, productivity and C/P ratio were also increased significantly in mutants, regarding the same figures obtained for parent (p < 0.05) that shows mutagens were used, have effected on quantity and quality of strain rennet. Key words: Clotting activity, Mutagensis, Microbial Rennet, Nitrous acid, Rhizomucor miehei, Strain improvement and UV