مقايسه كميت و كيفيت DNAاستخراج شده ازاسپرم گاو با روش نمكي و فنل-كلروفرم

Comparison of the Quality and Quantity of Extracted DNA from the Bovine Sperm Using Salting Out and Phenol – Chloroform Methods

مباحث مولكولي از اهميت روز افزوني در بررسي هاي علوم زيستي برخوردار است كه استخراج اسيدهاي نوكليك(DNA و RNA) اولين گام در اين بررسي ها مي باشد. لذا استفاده از يك روش استخراج DNA كه سريع، بي خطر، مقرون به صرفه و داراي كميت و كيفيت مطلوبي باشد، هميشه مورد نياز است. چندين روش مختلف به منظور حداقل كردن مراحل استخراج DNA توسط محققان مختلف گزارش شده كه نتايج مطالعات اخيرنشان?مي دهد، باتوجه به هدف و كاربردي كه از استخراج DNAمدنظر است، روش مطلوب استخراج DNA مي بايست انتخاب شود. هدف از اين تحقيق مقايسه كميت و كيفيت DNA با دو روش نمكي و روش فنل-كلروفرم مي باشد در اين تحقيق از 80 نمونه اسپرم گاوهلشتاين استفاده گرديد. بعد از استخراج DNA، به منظور تعيين كميت و كيفيت DNA استخراج شده، ازدستگاه نانودراپ و ژل آگارز استفاده شد. ميانگين حداقل مربعات كميت و كيفيت DNA استخراج شده با روش استخراج نمكي به ترتيب 88/114±27/813 (نانوگرم درميكروليتر) و 013/0±86/1 و با روش فنل-كلروفرم به ترتيب 16/23±31/175 (نانوگرم درميكروليتر) و 022/0±57/1 بود. همچنين نتايج الكتروفورز فقدان شكستگي در نمونه هاي DNA را نشان داد. مطالعه حاضرنشان مي دهد كه استخراج DNA از اسپرم با روش نمكي نتايج مطلوبتري نسبت به روش فنل-كلروفرم? داشت لذا به نظر مي رسد اين روش براي استخراج DNA از نمونه هاي اسپرم در آزمايشگاه هاي مولكولي مناسب تر باشد.

Molecular subjects have an extending importance in biological investigations the first of which is nucleic acids extraction (DNA and RNA). Therefore, there is always a need for a rapid, safe and reasonable method for DNA extraction with a desirable quality and quantity. In order to minimize the extraction steps, several different methods have been reported. The results of recent studies demonstrated that the desirable extraction method should be selected based on its aim and function. The objective of this study was to compare the quality and quantity of obtained DNA from salting out and phenol–chloroform methods. Eighty sperm samples of the Holstein Cow were used in the study. After DNA extraction, the spectrophotometer and agarose gel methods were used in order to determine the quality and quantity of the extracted DNA. The average of the minimum square of quantity and quality of DNA was 813. 27±114.88 (ng/µl) and 1.86±0.013 in the salting out method and175.31±23.16 (ng/µl) and 1.57±0.022 in the phenol – chloroform method, respectively. The electrophoresis results showed that there was no fraction in DNA samples. This study clarified that the results of DNA extraction using the salting out method was more desirable than the phenol – chloroform method; therefore, it seems that the salting out method is more appropriate for DNA?extraction from sprem samples in molecular labs.