كلونينگ و بيان دومن لكتيني پروتيين FimH به‌عنوان كانديد ايمونوژن عليه عفونت ادراري

Cloning and Expression of FimH Lectin Domain as a Candidate Immunogen against Urinary Infection

زمينه و هدف‌: عفونت دستگاه ادراري، يكي از شايع‌ترين عفونت‌ها در انسان محسوب مي شود و سويه هاي اشريشيا كلي يوروپاتوژن به‌عنوان شايع‌ترين عامل آن شناخته شده است. اين سويه ها در مثانه كلونيزه شده و باعث سيستيت مي‌شوند كه مي‌توانند با حركت به سمت كليه ها عامل پيلونفريت شوند. از آنجايي‌كه پروتيين FimH در كلونيزاسيون سويه هاي UPEC و ايجاد عفونت، نقش بسيار مهمي دارد اين مطالعه با هدف تهيه پروتيين FimH به‌عنوان كانديد ايمونوژن عليه عفونت ادراري صورت گرفت. روش‌ بررسي: در تحقيق حاضر، ادهسين fimH به‌عنوان كانديد ايمونوژن انتخاب شد. از اشريشيا كلي سويه 35218، DNA ژنومي استخراج و سپس ژن fimH با PCR تكثير گرديد. محصول PCR در وكتور pBlueScript SK كلون شده و با توالي‌يابي مورد تاييد قرار گرفت. سپس دومين لكتين ژن fimH با PCR تكثير و در وكتور بياني pET23a وارد شد. يافته‌ها: كلون به دست آمده pET/fimH با توالي يابي تاييد و در اشريشيا كلي سويه (DE3) Origami وارد شد. بيان پروتيين نوتركيب FimH در باكتري با SDS-PAGE و western blot مورد تاييد قرار گرفت. نتيجه‌گيري: طبق نتايج اين مطالعه پروتيين حاصل مي تواند براي ارزيابي ايمني زايي در حيوان بررسي گردد.

Background and Objectives: Urinary tract infection (UTI) is one of the most common infections in human, and Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) strains are the most common cause of UTI. These strains colonize in bladder and cause cystitis, which could cause pyelonephritis by movement to the kidneys. Since FimH protein has a very important role in colonization of UPEC strains and causing infection, this study was conducted with the purpose of designing FimH protein as a candidate immunogen against urinary infection. Methods: In the present research, fimH adhesin was selected as a candidate immunogen. Genomic DNA was extracted from E. coli 35218 and fimH gene was amplified by PCR. The PCR product was cloned into pBluescript SK vector and confirmed by sequencing. Then, fimH lectin domain was amplified and inserted into pET23a expression vector. Results: The obtained pET/fimH clone was verified by sequencing and transferred into E. coli origami (DE3) strain. Expression of recombinant FimH protein in E. coli was verified by SDS-PAGE and western blot methods. Conclusion: According to the results of this study, the produced protein could be investigated for evaluation of immunogenicity in animal models.