بررسي آلودگي تيلريا آنولاتا درگاوهاي كشتار شده با دو روش مقايسه اي واكنش زنجيره اي پليمراز (PCR) و ميكروسكوپي

Investigation of Theileria annulata infection in slaughtered of native cows by two methods of Polymerase Chain Reaction (PCR) and Microscopic examination

به منظور مقايسه واكنش PCR در تشخيص گاوهاي بومي حامل تيلريا آنولاتا نسبت به روش تهيه اسمير (گسترش نازك خون محيطي)، از اوايل اسفند ماه 1388 تا اواخر ارديبهشت ماه 1389 از 140 راس گاو بومي بالاي يك سال ارجاع داده شده به كشتارگاه، به صورت تصادفي نمونه گرفته شد. براي اين منظوراز وريد گوشي هر گاو، گسترش خوني تهيه و با الكل متانول فيكس شد تا براي رنگ آميزي به روش گيمسا و جستجوي انگل با كمك عدسي 100 ميكروسكوپ نوري و روغن امرسيون، مورد استفاده قرار گيرد. همچنين براي انجام آزمايش PCR، از وريد وداج نيز 9 سي سي خون در لوله هاي اتوكلاو شده اي كه حاوي 1 سي سي بافر سيترات 2/3 درصد بود، جمع آوري و به آزمايشگاه بيوتكنولوژي دانشگاه شهركرد منتقل گرديد. از 140 نمونه مورد بررسي توسط روش PCR، 56 نمونه مثبت (40%) و 84 نمونه منفي (60 %) بودند ولي در بررسي 140 نمونه اسمير تهيه شده، 12 مورد (57/8%) حاوي اشكال پيروپلاسمايي تيلريا آنولاتا و 128 نمونه (43/91%) عاري از اشكال پيروپلاسمايي انگل گزارش شدند. مقايسه بين دو روش PCR و تهيه اسميردر تشخيص گاوهاي حامل تيلريا آنولاتا، حاكي از اختلاف معني دار بين اين دو روش مي باشد (005/0?P). با توجه به نتايج بدست آمده در اين بررسي، حساسيت تكنيك PCR در تشخيص حاملين تيلريا آنولاتا نسبت به روش ميكروسكوپي بسيار بالاست. با توجه به شيوع بالاي آلودگي نياز به مطالعات اپيدميولوژي و اقدامات كنترلي را آشكار مي كند.

In order to compare PCR technique with smear method to find out Theileria annulata in the cows carrier,cattle over one year was referred to the slaughter, samples were taken randomly since February 88 till May 89. We took blood from ear vein, then fixed with methanol & colored with gimsa at least we sarched for parasits under objective lenses (100x). Also for PCR,we took 9ml blood from jagular vein of each cows & added 1ml citrate buffer 3.2%, then sensed to biochemistry laboratory of Shahrekord University.From 140 samples by PCR technique:56 samples) 40%) were positive & 84 samples(60%) were negative. From 140 samples by smear method 12 samples (8.75%) were positive & 128 samples (91.43%) were negative. Comparison between PCR and detection of Asmer prepration method to detection of Theileria carrier cow, showed significant differences between two methods (P < 0.005). According to the results obtained in this study, we understand that the sensitivity of PCR technique to diagnosis Theileria annulata carrier svery high compared to smears.Itis suggested that the epidemiological studies, and control measure be used.