توسعه يك روش PCR جهت تشخيص آلودگي هاي مايكوپلاسما در رده هاي سلولي و فراورده هاي بيولوژيكي

The development of a PCR method for mycoplasma testing in cell culture

مقدمه : آلودگي لاين هاي سلولي و فراورده هاي بيولوژيكي يكي از مشكلات عمده تكنيك كشت سلولي مي باشد. تشخيص سريع ودقيق آلودگي مايكوپلاسما قسمت مهمي از كنترل آزمايشگاه هاي كشت سلول است، وبايد روشي در هر آزمايشگاه كشت سلول وجود داشته باشد. سلول هاي آلوده منتهي به نتايج غير قابل اطمينان مي شود، بنابراين نياز به يك روش مطمين در آزمايشگاه امري ضروري مي باشد. واكنش زنجيره اي پليمراز يك تكنيك سريع، حساس و با ويژگي بالا در تشخيص باكتريها به شمار مي رود. هدف از اين مطالعه بررسي كارآيي PCR در شناسايي آلودگيهاي كشت سلول و ساير فرآورده هاي بيولوژيك است. روش كار: در اين مطالعه ابتدا تكنيك PCR با استفاده از پرايمرهاي MGSO و GPO-1و هدف ژني 16SrRNA بهينه گرديد. همچنين روشPCR مورد استفاده از لحاظ حساسيت و ويژگي بررسي گرديد. سرانجام DNAبه روشي ساده از 72 لاين سلولي استخراج و با PCR آزمايش شد. يافته ها: محصول 715 جفت بازي توسط پرايمرها تكثير و از طريق تعيين توالي تاييد گرديد. در بررسيهاي ويژگي، با هيچكدام از DNA هاي تست شده محصولي تكثير نشد. اين روش داراي حساسيتي در حد 10 كپي از ژنوم هدف بوده و با DNA ميكروارگانيسم هاي ديگر، آمپليكون ناخواسته اي مشاهده نشد. نتيجه گيري: نتايج حاصله از اين مطالعه مشخص مي كند كه اين روش مولكولي در تشخيص آلودگي مايكوپلاسما در كشت هاي سلولي و فراورده هاي بيولوژيك از حساسيت و ويژگي بالايي برخوردار مي باشد.

Aim and Background: Contamination ofcelllinesandbiologicalproductsisone of themajor problemsof cell culturetechniques. Rapiddetection ofMycoplasmacontaminationincell cultureisan importantpartof controlledlaboratory, and shouldthere bea methodinlaboratorycell cultures. Infectedcells,leading tounreliableresults, so the need for areliablemethod forlaboratoriesisessential. Polymerase chain reaction, a technique ofrapid, sensitive andspecificdetection ofbacteriais considered. The aim ofthisstudy was to evaluatethe efficacy ofPCRin the detectionofpollutants incell culturesand otherbiologicalproducts Materials and Methods:Inthisstudy,PCRtechniquesusingprimersMGSOandGPO-1andtargetgene16SrRNAwasoptimized. AlsousedPCRmethodwas evaluatedin terms ofsensitivity and specificity. Finally,a simpleDNAextractionandPCRof 72celllinestested. Result:A715bpproduct wasamplifiedby theprimersandwas confirmedbysequencing. TheReviewsfeature, withnone ofthe testedDNAwasamplified products. Thismethodhas asensitivitylimit of10copiesofthetargetDNA. No cross-reactivity with genomic DNA of other microorganisms was observed Conclusion: The results ofthisstudyindicatethatthemolecularmethodsfor detection ofMycoplasmacontaminationincell culturesorBiologicProductsofallergyandhighspecificityis .