بررسي اثرات سايتوتوكسيك محيط كشت حاصل از سلول هاي اپي تليال آمنيوتيك بر سلول هاي سرطاني HeLa و سلول هاي سرطان پستان MDA-MB-231

Evaluation of cytotoxic effects of condition medium from amniotic epithelial cells on cancer cell lines HeLa and MDA-MB-231

مقدمه: پرده‌ي آمنيون، داخلي‌ترين لايه خارج جنيني، داراي دو نوع سلول شامل سلول هاي مزانشيمي و اپي تليالي مي‌باشد. توانايي سلول هاي مزانشيمي پرده آمنيون در مهار سرطان گزارش شده است. در اين مطالعه تاثير سلول هاي اپي تليال آمنيوتيك بر روي زيست پذيري سلول هاي سرطاني و نقش آپوپتوز در اين روند مورد ارزيابي قرار گرفته است. روش‌ ها: سلول هاي اپي تليال حاصل از پرده آمنيون به مدت 24 ساعت كشت داده شدند. سپس محيط كشت روي آنها برداشته شد و در حجم‌هاي 200، 400، 600 و 800 ميكروليتر به كشت سلول هاي سرطاني (HeLa و MDA-MB-231) اضافه شد. درصد زيست پذيري سلول هاي سرطاني پس از 24 ساعت با آزمون MTT به دست آمد. هم چنين رنگ آميزي اختصاصي پروتيين هاي caspase 3 و 8 به وسيله‌ي ايمونوسيتوشيمي در سلول هاي سرطاني صورت گرفت. نتايج به صورت ميانگين ± انحراف معيار ارايه و با آزمون ANOVA يكطرفه بررسي شد. يافته ها: زيست پذيري سلول هاي سرطاني پس از 24 ساعت كشت با محيط روي سلول هاي اپي تليال آمنيوتيك، به صورت وابسته به دوز كاهش يافته بود و در دوز هاي بالاتر (600 و 800 ميكروليتر) كاهش بيشتري داشت. ميزان بيان پروتيين هاي Caspase 3 و 8 در سلول هاي سرطاني نيز به صورت وابسته به دوز افزايش يافت. نتيجه گيري: نتايج نويد بخش حاصل از اين مطالعه نشان داد كه سلول هاي اپي تليال آمنيوتيك مي‌توانند از طريق القا آپوپتوز بعنوان يك انتخاب در درمان سرطان مدنظر قرار گيرند.

Introduction: Amniotic membrane, the innermost layer of extra-embryonic tissue, contains mesenchymal and epithelial stem cells. The amniotic mesenchymal cells have the capability of inhibition of growth of cancer cells. In this research, the effects of amniotic epithelial cells on the viability of cancer cells and the role of apoptosis in this procedure were evaluated. Methods: Amniotic membrane derived epithelial cells were cultured for 24 hours and their supernatant was added to the culture of cancer cells (HeLa and MDA-MB-231) in volumes of 200, 400, 600 and 800 µl. Viability of cancer cell lines were measured by MTT assay after 24 hours. Also, the expression of caspase 3 and 8 (pro apoptotic proteins) was evaluated with immunocytochemistry. Analysis of data was performed using one-way analysis and post-Tukey test in ANOVA. Results: Viability of cancer cells were significantly decreased after culture with condition medium of amniotic epithelial cells in comparison to the control group. This decrease was dose-dependent and more significant at higher doses (600 and 800 µl). The expression of caspase-3 and caspase-8 was dose-dependently increased in cancer cells. Conclusion: The promising results of this study showed that amniotic epithelial cells have the capability to be investigated as a proper candidate for cancer therapy.