تاثير ضد التهابي شيكونين بر كشت آستروسيتي مغز موش صحرايي

Anti-inflammatory effect of Shikonin on cultured astrocytes derived from rat brain

مقدمه: آستروسيت ها در گستره اي از بيماري هاي نورودژنراتيو نقش دارند. آستروسيت فعال عوامل التهابي همچون نيتريك اكسايد (NO) و اينترلوكين ها (ILs) را آزاد مي كند. شيكونين، رنگيزه نفتوكويينوني ريشه گياه سنگدانه (Lithospermum erythrorhizon) اثرات ضد التهابي و ضد سرطاني دارد. اين مطالعه اثرات ضد التهابي و يا سمي شيكونين بر آستروسيت هاي كشت شده را مي كاود. روش ها: مغز نوزاد 2 روزه موش صحرايي بعد از جدا سازي مننژ، هموژنيزه و در محيط DMEMF12 + 10% FBS كشت شد. بعد از 10 روز آستروسيت ها جدا سازي، كشت و با خلوص بيش از 95% (به روش ايمنوسيتوشيمي) با غلظت هاي µM 100، 50، 30، 20، 10، 5، 2.5، 1، 0.5، 0.1 شيكونين براي يك ساعت تيمار و سپس در معرض LPS قرار گرفتند. واكنش MTT براي بررسي حيات سلول ها و سنجش ميزان NO (آزمون گريس، براي ارزيابي روند التهاب( پس از 24 و 48 ساعت انجام شد. يافته ها: غلظت هاي µM 30، 20، 10، 5، 2.5، 1 شيكونين فاقد اثر ضد التهابي و مرگ سلولي بود، اما در غلظت هاي µM 0.5 و 0.1 منجر به كاهش توليد NO و القا اثرات ضد التهابي شد (p < 0.001)، در غلظت هاي µM 100 و 50 منجر به كاهش توليد NO و مرگ سلولي شد (p < 0.001). نتيجه گيري: شايد كاهش توليد NO توسط آستروسيت، ناشي از مهار رهايش و بيان عوامل التهابي و سيگنالينگ سلولي همچون ILs وiNOS تحت اثر ضد التهابي شيكونين در محدوده غلظتي µM 0.5 و 0.1 بوده باشد اما كاهش توليد NO در غلظت هاي µM 100 و 50 شيكونين احتمالاً به دليل افزايش مرگ سلولي است كه نتايج مويد اين نيز بود.

Introduction: Astrocytes have an important role in many neurodegenerative diseases. Active astrocytes release inflammatory factors such as NO and ILs. Shikonin, a naphthoquinone pigment of Lithospermum erythrorhizon roots has anti-inflammatory and antitumoral effects. The present study aims to investigate the anti-inflammatory and toxic effects of Shikonin on cultured astrocytes. Methods: Two-day-old rat infantsʹ brains were homogenized after removal of the meninges, and cultured in DMEMF12+10% FBS medium. Ten days later, astrocytes were harvested and re-cultivated for more purifications to 95%, using immunocytochemistry method, and then treated by different concentrations of shikonin (0.1, 0.5, 1, 2.5, 5, 10, 20, 30, 50 and 100 µM) for one hour, which was followed by LPS exposure. Viability was measured by MTT assay and NO concentrations were assessed by Griess method, to reveal the inflammation process, after 24 and 48 hours. Results: Shikonin concentrations of 1, 2.5, 5, 10, 20 and 30 µM had no anti-inflammatory and cell death effects but at 0.1 and 0.5 µM showed a significant anti-inflammatory effect and ability to reduce NO production by astrocytes (p < 0.001) and at 100 and 50 µM showed a significant cell death effect and NO production reduction (p < 0.001). Conclusion: Reduction of NO production might be due to inhibition of release and expression of inflammatory and cell signaling factors such as ILs and iNOS under the shikonin anti-inflammatory effects at concentration around 0.1 and 0.5 µM. However, inhibition of NO production by shikonin at 50 and 100 µM is probably due to cell death induction.