شناسايي چند شكلي نواحي اگزون 4 و..... در گوسفند ماكويي

Detection of polymorphism in the exon 4 and UTR3 of TNFα gene in Makoei sheep

عامل نكروز تومور آلفا(TNF?) يك سيتوكين پيش التهابي است كه در تنظيم پاسخ ايمني از جمله فعاليت ماكروفاژها و مرگ سلولي از اهميت ويژه اي برخوردار است. ژن TNF? به صورت چندشكلي است و هاپلوتيپ هاي آن با مقاومت يا حساسيت به انواع بيماري در ارتباط هستند. تحقيق حاضر به منظور شناسايي چند شكلي ژنTNF? در گوسفند نژاد ماكويي با استفاده از روش واكنش زنجيره اي پلي-مراز(PCR) و تفاوت فرم فضايي رشته هاي منفرد (SSCP) انجام گرفت. براي اين منظور از 90 راس گوسفند ماكويي واقع در مركز پرورش و اصلاح نژاد ماكو به طور تصادفي نمونه هاي خون جمع آوري شدند. DNA ژنومي از نمونه هاي خون استخراج شد و قطعه اي با اندازه 273 جفت باز شامل قسمتي از ناحيه اگزون 4 و ناحيه غيركد شونده ?3 (3? UTR) ژن TNF? تكثير شد. الكتروفورز محصولات PCR براساس روش SSCP، منجر به شناسايي الگوهاي نواري متفاوت در جمعيت گوسفندان مورد مطالعه شد. براي اين جايگاه از ژن TNF?، سه آلل E، O و R به ترتيب با فراوانيهاي 33/73، 78/17 و 89/8 درصد و سه ژنوتيپ EE، OE و RE به ترتيب با فراواني هاي 67/46، 56/35 و 77/17 درصد شناسايي شدند.

Tumor necrosis factor -alpha (TNF?) is a proinflammatory cytokine that plays critical roles in the regulation of immune responses including macrophages activity and apoptosis. TNF? gene is polymorphic and its haplotypes have been associated with resistance or susceptibility to disease. This study was undertaken to identify the polymorphism of TNF? gene in Makoei sheep, using polymerase chain reaction (PCR) and single strand conformation polymorphism (SSCP) technique. A total number of 90 Makoei sheep were randomly selected from Makoei Sheep Breeding Station where located in Mako and blood samples were collected. Genomic DNA was extracted from blood samples in order to amplify 273 bp fragment comprising part of the fourth exon and the 3? untranslated region (3? UTR) of the ovine TNF? gene. PCR products were subjected to SSCP analysis. Based on the obtained SSCP patterns three alleles E, O and R with frequencies of 73.33, 17.78 and 8.89 % and three genotypes EE, OE and RE with frequencies of 46.67, 35.56 and 17.77 % were identified, respectively.