بيان ژن‏هاي ALS2 و ALS9 كانديدا آلبيكنس در زنان مبتلا به واژنيت كانديديايي با روش RT-PCR

Expression of Candida albicans ALS 2 and ALS 9 Genes Isolated from Women with Vaginal Candidiasis by RT-PCR

هدف: تقريباً سه چهارم زنان در معرض واژينيت كانديديايي هستند. در اين بين كانديدا آلبيكنس عامل 80 درصد موارد گزارش شده است. از عوامل بيماريزايي كانديدا آلبيكنس مي‏توان از ژن ALS نام برد كه در كد كردن دسته بزرگي از گليكوپروتيين‏ها كه عامل ارتقاي چسبندگي قارچ به ميزبان است نقش دارد. هدف از مطالعه حاضر بررسي ميزان بيان ژن‏هاي ALS2، ALS9 در كانديدا آلبيكنس جدا شده از واژينيت كانديديايي بوده است. مواد و روش‏ها: در اين مطالعه از زنان مبتلا به واژينيت كانديديايي توسط سواپ نمونه‏گيري انجام شد. سپس روي محيط‏هاي كشت قارچي سابوردكستروز آگار و كروم آگار كشت داده شدند. DNA از جدايه‏هاي كانديدا استخراج شد. به منظور تشخيص و تاييد قطعي كانديدا آلبيكنس از آزمون PCR-RFLP استفاده شد و سپس واكنش RT-PCR به منظور بررسي بيان نيمه كمّي ژن‏هاي ALS2، ALS9 با آغازگرهاي اختصاصي اين ژن‏ها انجام گرفت. نتايج: از ميان 55 جدايه باليني كانديدا آلبيكنس بيان ژن ALS2 در 23 جدايه باليني (8/41 درصد) و بيان ژن ALS9 در 21 جدايه (1/38 درصد) مشاهده شد كه در 20 مورد هر دو ژن داراي بيان بود. نتيجه‏گيري: بيان ژن ALS2 در 8/41 درصد و ژن ALS9 در 1/38 درصد جدايه‏هاي باليني مي‏تواند بيانگر ايفاي نقش اين ژن‏ها در ارتقاي چسبندگي و تشكيل بيوفيلم توسط كانديدا در عفونت‏هاي واژينال مي‏باشد. اما حضور مشترك هر دو ژن در 86 درصد موارد مثبت گزارش شده نشان دهنده نقش مثبت اين ژن‏ها در تكميل فعاليت ديگري دارد.

Objective: Approximately three-fourths of women experience an episode of vaginal candidiasis. Candida albicans(C. albicans) is the etiological agent in over 80% of cases. C. albicans has numerous virulence factors such as the agglutinin-like sequence (ALS) genes which code the large glycoprotein family that has a role in the adherence of Candida. The present study aims to evaluate expressions of the ALS 2, 9 genes in C. albicans which have been isolated from vaginal candidiasis. Methods: We collected 150 wet vaginal swabs from patients diagnosed with vaginal candidiasis. Samples were cultured on sabouraud dextrose and CHROMagar for morphological analysis. Then, DNA was extracted by glass bead and lysis buffer. We performed RFLP-PCR to confirm the presence of C. albicans. For investigation of semi-quantitative expression of ALS2 and ALS9 genes, we performed RT-PCR by using specific primers. Result: From 55 clinical isolates of C. albicans, 36.36% expressed both the ALS2 and ALS9 genes. There were 23 (41.81%) isolates that expressed only the ALS2 gene and 21 (38.1%) expressed the ALS9 gene. Conclusion: Expressions of the ALS9 (41.8%) and ALS 2 (38.1%) genes in Candida isolates may indicate that these genes play a critical role in adhesion and biofilm formation of vaginal infection. However the presence of both genes in 36.36% of the isolates suggests a positive role for these genes in augmentation of their activities.