ارزيابي مولكولي و افزايش فراواني ژن مقاومت به نماتد مولد سيست در طي چند نسل خود گرده?افشاني چغندرقند

Molecular Evaluation and Increasement of Cyst Nematode Resistance Gene Frequency During Several Generations of Self Pollination in Sugar Beet

به منظور افزايش فراواني ژن مقاومت به نماتد مولد سيست چغندرقند از توده اصلاحي 261*(20314*W-1009) كه حامل ژن Hs1pro-1بود استفاده شد. اين توده در سال اول در برنامه سلكسيون قرار گرفت و بوته ها در مزرعه علامت گذاري و نمونه هاي برگي جهت استخراج DNA تهيه گرديد و سپس ارزيابي مولكولي گياهان حامل ژن مقاومت با استفاده از نشانگر مولكولي STS و آزمون PCR اختصاصي انجام گرفت. در سال دوم اين تحقيق، ريشه هاي ورناليزه شده حامل ژن مقاومت پس از يادداشت برداري وضعيت حضور علايم گال روي ريشه ها در زير كيج جهت تهيه بذر S1 در مزرعه ايزوله كشت گرديدند. بذور برداشت شده S1 همزمان در گلخانه جهت آزمون مولكولي و در مزرعه اشتكلينگ جهت تهيه ريشه كشت و در طول فصل زمستان در داخل مزرعه ورناليزه شدند. نتايج آزمون مولكولي گياهانS1 با استفاده از نشانگر Hs1pro-1 نشان داد كه حضور ژن مقاومت در لاين هاي S1 بين 25 تا 63 درصد متغير است. در سال سوم، مانند سال قبل، ريشه هاي حامل ژن مقاومت كه در زمستان سال قبل ورناليزه شده بودند در زير كيج جهت تهيه بذر S1 جديد در مزرعه ايزوله كشت گرديدند. بذور برداشت شده S1 در گلخانه جهت آزمون مولكولي كشت شدند. نتايج آزمون مولكولي گياهان S1 با استفاده از نشانگر Hs1pro-1 نشان داد كه حضور ژن مقاومت در لاين هاي S1 منتخب افزايش يافته است و بين 39 تا 80 درصد متغير مي باشد. بنابراين نتايج نشان داد كه با چند نسل خودگرده افشاني لاين-هاي حامل ژن مقاومت به همراه انتخاب ژنوتيپي گياهان مقاوم با استفاده از نشانگر مولكولي مي توان به لاين هاي با درصد بالاي ژن مقاومت دست يافت.

In order to increase beet cyst nematode resistance gene frequency, one population named 261*(20314*W-1009) that contains Hs1pro-1 was used in present research. In first year, the population was planted in selection plotes in field. Single plants were labeled and leaf samples were prepared. Then DNA extraction from leaves was done and molecular analysis of plants containing resistance gene accomplished using STS marker and specific PCR test. In second year, gall signs onto resistant vernalized roots were noted and the roots were planted under cages in isolated plots to produce S1 seeds. The S1 seeds were sowed in greenhouse for molecular analysis and in the steckling field to produce the roots. The roots were vernalized in the field in winter season. The molecular results of the S1 plants by Hs1pro-1 marker showed that presence of the resistant gene among the S1 lines is varied 25 to 63 percent. In third year, the vernalized roots were planted under cages in isolated plots to produce new S1 seeds. The new S1 seeds were grown in greenhouse for molecular analysis. The molecular results of the new S1 plants by Hs1pro-1 marker showed enhancement of the resistant gene among the S1 lines that varied 39 to 80 percent. The results showed that resistance gene frequency can be increased by increasing in selfing number and genotypic selection by molecular marker.