ارزيابي نشانگرهاي سطحي و ژن‌هاي وابسته به آن‌ها در سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي ژله وارتون بند ناف انساني

Evaluation of surface markers and related genes of the human ‎umbilical cord derived Wharton’s jelly mesenchymal stem cells

سابقه و هدف: ژله وارتون بند ناف منبع غنی و در دسترسی از سلول‌های بنيادی است كه قدرت تكثير و تمايز بالايی دارد. هدف از ‏تحقيق حاضر، ارزيابی نشانگرهای سطحی و ژن‌های وابسته به آن‌ها در سلول‌های بنيادی مزانشيمی ژله وارتون بود.‏ مواد و روش‌ها: قطعاتی از ژله وارتون بند ناف انسانی تشريح و در محيط ‏DMEM‏ (‏Dulbeccoʹs modified Eagleʹs ‎medium‏) حاوی سرم جنين گاوی (‏Fetal bovine serum‏ يا ‏FBS‏) 20 درصد كشت داده شد. سپس آن دسته از سلول‌های بنيادی ‏مهاجرت كرده از كناره‌های اين قطعات دوباره در محيط ‏DMEM‏ حاوی ‏FBS‏ 10 درصد كشت و پاساژ داده شدند. در نهايت، ‏نشانگرهای سطحی و ژن‌های وابسته به آن‌ها در سلول‌های بنيادی مزانشيمی ژله وارتون به روش فلوسايتومتری و نيز ‏RT-PCR‏ ‏(‏Reverse-transcriptase polymerase chain reaction‏) مورد بررسی قرار گرفت.‏ يافته‌ها: 7-5 روز بعد از كشت، سلول‌های بنيادی شروع به مهاجرت از قطعه بافتی كشت داده شده كردند و پس از 18-16 روز به ‏تراكم سلولی 80 درصد رسيدند. مشاهدات ميكروسكوپی سلول‌های بنيادی در كشت اوليه دو جمعيت متفاوت، سلول‌های شبه ‏فيبروبلاستی و شبه اندوتليالی پهن را نشان داد. تحليل فلوسايتومتری به روش رنگ‌آميزی دوگانه بيان نشانگرهای سطحی 44‏CD، ‏‏73‏CD، 90‏CD‏ و 105‏CD‏ و عدم بيان 34‏CD‏ و 45‏CD‏ را در اين سلول‌ها به تصوير كشيد. يافته‌های ‏RT-PCR‏ نيز نشان داد كه بيان ‏اين نشانگرها در پاساژهای مختلف تغييری نكرد.‏ استنتاج: سلول‌های بنيادی ژله وارتون از مورفولوژی سلول‌های مزانشيمی برخوردار هستند و نشانگرهای سطحی مربوط به آن‌ها را ‏بيان می‌كنند. هم‌زمان، نشانگرهای سطحی سلول‌های بنيادی خون‌ساز در آن‌ها بيان نمی‌شود.‏

Background and purpose: Umbilical cord derived Whartonʹs jelly is an enriched and accessible ‎source of stem cells with highly proliferative and differentiation potential. This study aimed to evaluate the ‎surface markers and related genes of the stem cells isolated from the human Whartonʹs jelly.‎ Materials and methods: Explants of the human umbilical cord derived Whartonʹs jelly was dissected ‎and cultured in Dulbeccoʹs modified Eagleʹs medium (DMEM) supplemented with 20% Fetal bovine serum ‎‎(FBS). Then, those cells migrated from explantʹs boundary were replated and passaged in DMEM containing ‎‎10% FBS. Finally, by using flowcytometry and (Reverse–transcriptase polymerase chain reaction) RT-PCR ‎techniques different surface markers and related genes were analyzed.‎ Results: 5-7 days post-plating, the stem cells initiated the migration from cultured explants and ‎showed up to 80% densities on days 16-18. Light microscopy demonstrated two distinct cell populations ‎including fibroblast-like and flat endothelial-like cells. Dual staining with flowcytometry also revealed that ‎the cultured cells were found to be positive for CD44, CD73, CD90, CD105 and negative for CD34 and CD45. ‎RT-PCR showed no changes in CD marker expression pattern during different passages.‎ Conclusion: Human Whartonʹs jelly derived stem cells appear mesenchymal cell morphology and ‎express related surface markers but no hematopoietic stem cell markers.‎