توليد سلول‌هاي رده هماتوپويتيك انساني از سلول‌هاي شبه جنيني

Generation of hematopoietic lineage cells from embryonic like cells

زمينه: تبديل اپي ژنتيكي سلول هاي سوماتيك مختص بيمار به سلول هاي روياني به دليل اهميت آن در پيوند سلول هاي بنيادي و سازگاري با گيرنده ازارزش بسياري برخوردار است. با اين حال، به كارگيري درماني سلول هاي به دست آمده به دليل مشكلات فني و موضوعات اخلاقي امكان پذير نيست. اخيرا روش هاي جديدي مطرح شده كه با بيان اكتوپيك فاكتورهاي رونويسي دوره روياني سلول سوماتيك را به سلول شبه روياني تبديل كرده اند. محدوديت اين روش به كارگيري ويروس هاي جهش زاي آسيب رسان به ژنوم مانند رتروويروس يالنتي ويروس مي باشد. هدف اصلي اين بررسي توليد سلول هاي بنيادي هماتوپويتيك انساني از سلول هاي فيبروبلاست القا شده با وكتورهاي بي‎خطر آدنوويروسي حامل ژن هاي فعال دوره روياني بود. مواد و روش‌ها: فيبروبلاست هاي جدا شده از پوست ختنه گاه تكثير و آدنو ويروس هاي نو تركيب حامل ژن هاي cMyc، Klf4، Oct4، Sox2 انساني به محيط كشت اضافه گرديد. پس از تشكيل كلون هاي شبه جنيني و تكثير سلولي به محيط كشت جنيني بدون bFGF منتقل و اجسام شبه روياني در محيط تمايزي با و بدون استروما به مدت 14 روز كشت داده شدند. يافته‌ها: بيان ژن CD34 و شاخص هاي آنتي ژني CD38، CD34، CD133 در محيط تمايزي استرومايي اختلاف معني داري با محيط غيرتمايزي و بدون استروماداشتند. نتيجه گيري: اين يافته ها نشان مي دهند ميزان تمايز هماتوپويتيك سلول هاي Adeno-iPS در محيط استرومايي زياد است و نيازي به استفاده از فاكتور رشد نيست، در حالي كه در تمايز هماتوپويتيك در محيط غير تمايزي و تمايزي بدون استروما هيچ تفاوتي ديده نمي شود.

Background: Epigenetic reprogramming of somatic cells into embryonic stem cells has attracted much attention, because of the potential for stem cell transplantation and compatibility with recipient. However, the therapeutic application of either nuclear transfer or nuclear fusion of somatic cell has been hindered by technical complications as well as ethical objections. Recently, a new method is reported whereby ectopic expression of embryonic specific transcription factors was shown to induce fibroblasts to become embryonic like SCs (induced pluripotent stem cells). A major limitation of this method is the use of potentially harmful genome integrating viruses such as reto- or lentivirus. The main aim of this investigation was generation of human hematopoietic stem cells from induced fibroblasts by safe adenovectors carrying embryonically active genes. Material and Methods: Isolated fibroblasts from foreskin were expanded and recombinant adenoviruses carrying human Sox2, Oct4, Klf4, cMyc genes were added to culture. After formation of embryonic like colonies and cell expansion, they were transferred to embryonic media without bFGF, and embryoid bodies were cultured on stromal and non-stromal differentiation media for 14 days. Results: Expression of CD34 gene and antigenic markers, CD34, CD38 & CD133 in stromal culture showed significant difference with non-differentiation and non-stromal media. Conclusion: These findings show high hematopoietic differentiation rate of Adeno-iPS cells in stromal culture and no need to use growth factors. While, there was no difference between non-differentiation and non-stromal media.