بررسي مولكولي گونه هاي بيماريزاي آسپرژيلوس جدا شده زخم پاي افراد ديابتي با استفاده از روش Nested PCR

Molecular Survey of Pathogen Species of Aspergillus Isolated from Diabetic Foot Lesion Using Nested PCR Method

زمينه و هدف: روش PCR حساسيت و ويژگي بالايي را جهت تعيين DNA قارچي و شناسايي سريع اغلب گونه هاي شايع كلينيكي آسپرژيلوس را ارايه ميدهد. هدف از اين مطالعه مقايسه كشت با روش nestedPCR براي تعيين آسپرژيلوزيس از زخم پاي بيماران ديابتي مراجعه كننده به بيمارستان امام خميني تهران بود. روش: 65 نمونه زخم هاي مشكوك به آسپرزيلوزيس موجود در زخم پاي ديابتي تحت شرايط كشت و PCR قرار گرفتند. ايزوله هاي آسپرژيلوس در حد جنس بر روي محيطSGA شناسايي شدند. سپس استخراج DNA انجام و واكنشهاي PCR و Nested PCRانجام شد. از بيماران نمونه سرم تهيه و واكنش اليزا جهت يافتن آنتي بادي هاي ضد جنس و گونه انجام شد. نتايج با استفاده از آزمون آماري آناليز واريانس تجزيه و تحليل شدند و P < 0.05 معني دار در نظر گرفته شد. يافته ها: از مجموع 65 نمونه ؛ 39 نمونه بعنوان آسپرژيلوزيس حاصله از روش كشت تشخيص داده شدند. در روشPCR وNested PCR با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي 41 مورد بعنوان آسپرژيلوس تشخيص داده شدند كه از نظر در تشخيص گونه با هم يكسان ولي در تشخيص جنس با هم متفاوت بودند. نتايج اليزا نشان داد كه تعداد 39 نمونه مثبت بودند. نتيجه گيري: اگرچه PCR حساسيت كمتري نسبت به سنجش Nested PCR دارد ولي اكثرا شايعترين گونه هاي بيماريزا يعني آسپرژيلوس فوميگاتوس را تعيين ميكند. نتايج ما نشان ميدهند كه تفاوت معني داري مابين نتايج كشت و نتايج nPCRدر شناسايي جنس آسپرژيلوس وجود دارند.

Background and Aim: PCR has high sensitivity and specificity for the determination offungal DNA. It is also useful for rapid identification of the most common species of Aspergillus. The purpose of this study was to compare culture method with nested PCR method to determine Aspergillesion in diabetic foot patient in Imam Khomeini Hospital, Tehran. Material and Methods: Sixty-five cases of suspicious diabetic foot lesion Aspergillusis were examined under culture and molecular method. Aspergillus isolates were identified to genus level on the SGA. DNA extraction performed and PCR and Nested PCR reactions were done. Serum samples were collected and ELISA for anti bodies against all species were performed. Results were analyzed using ANOVA and P was considered significant at P < 0.05. Results: Of the total of 65 samples, 39 were diagnosed as Aspergillos is obtained from cultures. In PCR and Nested PCR using specific primers, 41 samples were diagnosed as Aspergillus.PCR and Nested PCR for species recognition were equal but differences in gender were recognized. ELISA results showed that 39 samples were positive. Conclusion: Although PCR is less sensitive than nested PCR, but we can recognize the most common pathogenic species, Aspergillus fumigatus. Our results showed significant differences between the results of culture and nested-PCR in the identification of the Aspergillus genus.