ارزيابي رشد فوليكول‏‌هاي مراحل مختلف تكويني طي كشت تخمدان موش نابالغ در حضور غلظت‏هاي مختلف عامل رشدي تمايزي 9B

Evaluation of the Follicular Growth during Mouse Ovarian Culture in Medium Supplemented with Different Doses of Growth Differentiation Factor 9B

هدف: عامل رشدي تمايزي 9B عامل رشد پروتييني مشتق از تخمك است كه بيان آن در تكوين فوليكول‏هاي تخمدان ضروري است. اين عامل به‏واسطه گيرنده خود كه بر سطح سلول‏‌هاي گرانولوزا قرار دارد اثر خود را اعمال مي‌كند. اثر عامل رشدي تمايزي 9B بر رشد فوليكول‏‌هاي مراحل مختلف تكويني به‏ويژه فوليكول‏‌هاي بدوي و اوليه نا‏مشخص است. هدف از اين مطالعه بررسي اثر عامل رشدي تمايزي 9B بر رشد فوليكول‏هاي مراحل مختلف تكويني طي كشت تخمدان موش نابالغ بود. مواد و روش‌ها: از موش‏هاي ماده نژاد NMRI با گروه سني 14 روز استفاده شد. حيوانات به طريق جابه‏جايي مهره‏هاي گردني كشته شدند. تخمدان‏هاي به‏دست آمده از حيوانات تحت شرايط انكوباتور مرطوب CO25 درصد و دماي 37 درجه سانتي‏گراد به‏مدت 7 روز كشت داده شدند. گروه‏‌هاي مورد مطالعه شامل تخمدان‏هاي چهارده روزه كشت شده در محيط پايه و تخمدان‌‏هاي چهارده روزه كشت شده در محيط پايه غني شده با غلظت‏هاي 10، 20 و 40 نانوگرم بر ميلي‏ليتر عامل رشدي تمايزي 9B بود. در پايان دوره كشت، از تخمدان‏‌هاي كشت شده براي شمارش فوليكول‏هاي مراحل مختلف تكويني برش‏‌هاي بافتي تهيه شد و پس از رنگ‏آميزي به روش هماتوكسيلين و ايوزين تعداد فوليكول‏هاي بدوي، اوليه، پره آنترال و آنترال شمارش شد. نتايج: نتايج حاصل از اين مطالعه نشان داد كه تخمدان‏هاي كشت شده در محيط‏هاي حاوي غلظت‏هاي مختلف عامل رشدي تمايزي 9B نسبت به گروه كشت شده در محيط پايه افزايش معني‏داري در درصد فوليكول‏هاي آنترال و كاهش معني‏داري از نظر درصد فوليكول‏هاي پره آنترال دارند. با اين حال ميانگين درصد فوليكول‌‏هاي بدوي و اوليه در تخمدان‏‌هاي كشت شده در محيط پايه و كشت شده در غلظت‏‌هاي 10، 20 و 40 نانوگرم بر ميلي‏ليتر عامل رشدي تمايزي 9B از نظر آماري تفاوت معني‌داري نشان نداد. نتيجه‌گيري: در مجموع تحقيق حاضر نشان داد كه عامل رشدي تمايزي 9B منجر به تحريك رشد فوليكول‌‏هاي پره آنترال به آنترال مي‏شود در حالي‏كه بر رشد فوليكول‏هاي مراحل بدوي و اوليه تاثير مشخصي ندارد.

Objective: Growth differentiation factor 9B (GDF9B) is an oocyte-derived growth factor. This protein is essential for the development of ovarian follicles and acts mainly by binding to its receptor on the surface of granulosa cells. The effect of GDF9B on the growth of follicles in various developmental stages, particularly primordial and primary follicles, is unknown. Thus the aim of this study is to investigate these effects after mouse whole ovarian culture. Methods: Female NMRI mice (14 day-old) were sacrificed by cervical dislocation Subsequently their collected ovaries were cultured in ?-MEM basic medium (control group) and medium supplemented with different doses of recombinant GDF9B (10, 20, 40 ng/ml) for seven days in 5% CO2 and 37°C. At the end of the culture period, serial sections of ovaries were prepared and stained with hematoxylin and eosin. The follicles were counted in the primordial, primary, preantral and antral stages and compared among the different groups. Results: In GDF9B supplemented groups the percentage of antral follicles significantly increased whereas the percentage of preantral follicle decreased when compared with the control group. However there were no significant differences between the percentage of primordial and primary follicles in all supplemented GDF9B (10, 20, 40 ng/ml) groups and the control. Conclusion: Overall, this study showed that GDF9B stimulated the growth of preantral follicles to the antral stage. However this factor did not have a remarkable effect on the growth of primordial and primary follicles.