طراحي كيت اندازه‌گيري IgE اختصاصي آلرژن‌هاي شير گاو به‌روش الايزا

The design of a “specific- IgE ELISA assay kit” for major cow’s milk allergens

زمينه و هدف: شايع‌ترين سن بروز آلرژی غذايی در كودكان، كمتر از يك‌سال و آلرژی به شير گاو شايع‌ترين آلرژی غذايی در اين سن می‌باشد. برای تعيين نوع آلرژنی كه بيمار به آن حساس است از آزمون‌های متعدد اختصاصی تشخيص آلرژی، كه يكی از مهم‌ترين آن‌ها ارزيابی IgE اختصاصی عليه آلرژن می‌باشد، استفاده می‌گردد. در اين مطالعه يكی از بهترين روش‌های سنجش IgE اختصاصی كه به‌روش الايزا انجام می‌گيرد بر عليه سه نوع پروتيين شير گاو شامل كازيين، آلفالاكتالبومين و بتالاكتوگلبولين راه‌اندازی شده است. روش بررسی: ابتدا ديسك‌های حامل آلرژن، طی انكوباسيون كاغذ نيتروسلولزی با هر يك از آلرژن‌های مورد مطالعه تهيه شد. پس از انكوبه كردن سرم‌ها بر روی ديسك‌های آلرژن، كونژوگه آنزيمی آلكالن فسفاتاز برای تست استفاده گرديد. پس از بهينه‌سازی كليه متغيرها، همه آن‌ها در كنار هم به‌شكل يك كيت طراحی شده و نمونه‌های سرم مثبت و منفی با آن همزمان با كيت‌های تجاری استاندارد ارزيابی و مقايسه گرديد. يافته‌ها: نتايج حاصل از ارزيابی IgE اختصاصی در نمونه‌ها با كيت‌های طراحی شده در مقايسه كيت‌های تجارتی نشان دادند كه ويژگی كيت‌های طراحی شده در اين طرح برای كازيين، آلفالاكتالبومين و بتالاكتوگلبولين به‌ترتيب 93%، 7/89% و 8/82% و حساسيت آن‌ها به‌ترتيب 3/86%، 3/81% و 6/89% بوده و با مقادير به‌دست آمده از كيت‌های تجاری مشابه بودند (اختلاف معنی‌دار ديده نشد). نتيجه‌گيری: با توجه به حساسيت و ويژگی بالای كيت‌های طراحی شده و نتايج مشابه با كيت‌های تجاری می‌توان نتيجه‌گيری نمود كه اين كيت‌ها را می‌توان در داخل با قيمت تمام شده ارزان‌تر تهيه نموده و آن‌ها را به‌عنوان جايگزين كيت‌های تجاری گران‌قيمت جهت امور تشخيصی به‌كار برد.

Background: The hypersensitivity to cow’s milk allergens is the most common allergies in children at the first year of life. The specific IgE evaluation is one of the important methods in diagnosis of allergic disease. The aim of this study was development of a sensitive and credible procedure for detection of cow’s milk allergens specific IgE. Methods: The allergen discs were prepared by coating of allergens on nitrocellulose paper. After incubation of allergen discs with patients serum, anti-human IgE conjugated were used. In following optimization of any step of ELISAs test, a complete kit was designed. Efficiency of designed kits were evaluated by determination of specific IgE in normal (n= 29) and patient (n= 153) children serum samples and compared with commercial kits. Results: The specific IgE against three allergrns involving casein, -lactalbumin and - lactoglobulin were measured on normal and patient children serum with designed and commercial ELISA kits. Results were demonstrated specificity of 93%, 89.7% & 82.8% and sensitivity of 86.3%, 81.3% & 89.6% respectively for casein, -lactalbumin and - lactoglobulin specific kits and these results were similar and comparable with commercial kits. Conclusion: The Designed kits in comparison with the commercial kits were showed equivalent sensitivity and specificity. The designed kit stability was ultimately one month, probably due to don’t using of stabilizers for prepared allergen discs. We suggest these kits for commercial product in Iran and we hope be helpful for easier accesses for Cow’s milk allergy diagnosis and extend that for other allergens.