فراواني ژن‌هاي بتالاكتامازي وسيع‌الطيف گروه TEM و (AmpC (DHA, MOX به روش PCR در ايزوله‌هاي باليني اشريشياكلي

Molecular detection of TEM and AmpC (Dha, mox) broad spectrum β-lactamase in clinical isolates of Escherichia coli

زمينه و هدف: آنزيم‌هاي بتالاكتامازی، مهم‌ترين عامل مقاومت به آنتی‌بيوتيك‌های خانواده بتالاكتام در ميان باكتری‌های گرم منفی می‌باشند. امروزه شاهد افزايش روز افزون عفونت‌های ناشی از آن‌ها در جهان هستيم كه اين امر به عنوان يك موضوع مهم مورد توجّه محققين در آمده است. آنزيم‌های بتالاكتامازهای TEM به علت شيوع بالا و AmpC به‌دليل ايجاد اختلال در تست‌های فنوتيپی از اهميت زيادي برخوردارند. از آنجا كه ژن‌های خانواده بتالاكتامازی دارای زيرگروه‌های فراواني بوده بر اين اساس به‌كارگيری روش‌های مولكولی به ويژه استفاده از پرايمرهاي يونيورسال به منظور شناسايی كامل اين زيرگروه‌ها ضروری است، هدف از اين تحقيق شناسايی و بررسی شيوع ژن‌های بتالاكتامازی TEM و AmpC (DHA, MOX) در ايزوله‌های بالينی Escherichia coli با استفاده از پرايمرهاي يونيورسال می‌باشد. روش بررسی: تعداد 500 نمونه بالينی از بيمارستان‌های شهر تهران جمع‌آوری گرديد كه با استفاده از تست‌هاي بيوشيميايی، تعداد 200 ايزوله E.coli غربال شد و از طريق تست‌هاي فنوتيپی Disk diffusion method و Combined disk، از لحاظ توليد آنزيم‌هاي بتالاكتامازی مورد ارزيابی قرار گرفتند. سويه‌های فنوتيپ مثبت، جهت جستجوی ژن‌هاي مذكور توسط پروسه PCR بررسی شدند. يافته‌ها: از 200 ايزوله مورد بررسی (64%)، 128 سويه از طريق تست‌های فنوتيپی برای PCR ژن‌های TEM وAmpC  انتخاب شد، (8/57%)74 و (9/3%)5 ايزوله به ترتيب حاوی ژن‌های TEM و  DHAبود و ژن MOX در هيچ ايزوله‌ای شناسايي نشد. نتيجه‌گيری: با توجه به نتايج حاصله، به كارگيری روش‌هاي مولكولی در كنار روش‌های فنوتيپی جهت تشخيص كامل اين نوع مقاومت‌ها امری ضروري بوده و به علت شيوع بالای اين مقاومت، بهتر است كه نسبت به استفاده از پروتكل‌هاي درمانی رايج در كشور اقدامات مناسب‌تری به عمل آيد.

Background: Beta- lactamase enzymes are the most important resistant factors to beta lactam antibiotics among gram negative bacteria. Nowadays, the prevalence of beta- lactamase infection is increasing worldwide and drawn the scientists attention as an important subject. Due to high prevalence of bacteria contained TEM beta lactamase and AmpC enzymes, using molecular methods especially designing universal primers could be valuable to detect all of them. The aim of this study was to determine the prevalence of TEM and AmpC (Dha and MOX) beta- lactamase genes using universal primers. Methods: A total of 500 clinical specimens from various Hospitals in Tehran, Iran were collected and analyzed for E. coli based on biochemical tests. These clinical specimens were also screened by Disk diffusion agar, combined disk method and PCR to detect the samples producing extended- spectrum beta- lactamase. Results: Overall 200 isolates of Escherichia coli were collected from the 500 clinical specimens out of which 128(64%) isolates were positive by PCR assay and showed bla- TEM, bla- AmpC (Dha, MOX) genes, 74(57.8%) and 5(3.9%) to have bla- TEM and bla Dha, respectively. Mox gene was not detected in any of the specimens. Conclusions: Our results revealed that using the molecular methods with phenotype methods is very essential for complete detection of Beta- lactamases. There is the need for updating the treatment protocol because the prevalence of this resistance is increasing.