مقاله كوتاه پژوهشي شناسايي سرولوژيكي و ملكولي ويروس كوتولگي زرد پياز و تعيين پراكنش آن در استان هاي خراسان رضوي و شمالي

Identification and Distribution of Onion yellow dwarf virus by Serologic and Molecular Methods in North and Razavi Khorasan Provinces

به منظور شناسايي ويروس كوتولگي زرد پياز در بهار و تابستان 1389 از مناطق عمده پياز كاري استان خراسان نمونه برداري صورت گرفت. بدين منظور نمونه برداري تصادفي از مزارع حومه شهرستان هاي مشهد، چناران، قوچان، تربت حيدريه، نيشابور، بردسكن، گناباد، فريمان، فاروج، شيروان، بجنورد و آش خانه به عمل آمد. نمونه هاي برگي با علايم موزاييك، زردي، رگوز و پيچيدگي همراه با كوتولگي غده هاي پياز جمع آوري شدند. آلودگي نمونه هاي فوق با استفاده از آزمون سرولوژيك DAS-ELISA و آغاز گرهاي طراحي شده براي تكثير ژن پروتيين پوششي (CP) در واكنش RT-PCR مورد ارزيابي قرار گرفتند. بدين منظور استخراج RNA از نمونه هاي آلوده با استفاده از كيت آماده(plus)RNX™ انجام شد و به دنبال آن آزمون RT-PCR جهت ساختن cDNA و سپس آزمون PCR انجام گرديد. الكتروفورز محصول PCR در ژل آگارز 5/1 %، قطعه تكثير شده bp291 مربوط به ژن كامل CP را در تمام نمونه هاي مورد آزمايش نشان داد. قطعه تكثير شده جهت توالي يابي ارسال و تاييد شد. همچنين آلودگي با روش سرولوژيك تاييد گرديد. همچنين صحت بيماري زايي ويروس نيز در شرايط گلخانه بر روي سه گونه از گياه سلمه مورد بررسي قرار گرفت. نتايج به دست آمده نشان داد كه مزارع حومه چناران، گناباد و نيشابور به اين ويروس آلوده مي باشند و در مزارع ساير شهرستان ها آلودگي با درصد بسيار ضعيف مشاهده مي شود يا هيچ آلودگي مشاهده نگرديد.

In order to detect Onion yellow dwarf virus in Khorasan province in Iran, onion samples from major onion growing regions where collected in spring and summer 2010. To determine the distribution of the virus, samples were randomly taken from onion fields in vicinity of Mashhad, Chenaran, Quchan, Torbate Heydarye, Neyshabur, Bardaskan, Gonabad, Fariman, Faruj, Shirvan, Bojnourd and Ash khane have been tested by DAS- ELISA method. Leaf samples showing mosaic, yellowing, rolling symptoms and complexity associated with dwarf onion bulbs glands were collected.Infection of samples with Onion yellow dwarf virus were confirmed using DAS-ELISA and RT-PCR tests. Total RNA was extracted from infected samples using RNX ™ (plus) kit. To perform RT-PCR test cDNA was made and then PCR test was carried out. 1.5% Agarose gel electrophoresis of PCR products resulted in a fragment of 291 bp from CP of the virus. Amplified fragment were then sequenced. The virulence of the virus in greenhouse on three Chenopodium species (Chenopodium album, C. quinoa, C. amaranticolor) was confirmed. The results showed that onion field in Chenaran, Gonabad and Neyshabour infected with Onion yellow dwarf virus but no infection in other places.