مقاله كوتاه پژوهشي مقايسه كميت و كيفيت روشهاي مختلف استخراج دي ان اي از زنبورهاي پارازيتوييد جنس Lysiphlebus به روش اسپكتروفتومتري

Brief report Comparison of Quantity and Quality of Different DNA Extraction Methods for Lysiphlebus Species by Spectrophotometer

استخراج دي ان اي ژنومي با كميت و كيفيت مناسب اولين مرحله در شناسايي مولكولي حشراتي است كه شناسايي مورفولوژيك آن ها مشكل و تحت تاثير يك مرحله خاص از زندگي، اندازه و جنس قرار دارد. انتخاب يك پروتكل مناسب به منظور تهيه دي ان اي خالص از اين حشرات اهميت بسزايي در اين امر دارد. در تحقيق‌ حاضر پنج روش رايج استخراج دي ان اي در آزمايشگاه‌هاي حشره‌شناسي شاملCTAB، Phenol- chloroform، EST، Lysis buffer و Chelex، از لحاظ كميت و كيفيت دي ان اي استخراج شده با هم مقايسه شده اند. غلظت دي ان اي استخراج شده با استفاده از اسپكتروفتومتري اندازه‌گيري شد. نتايج تجزيه واريانس تفاوت معني داري را بين روش‌هاي مورد بررسي نشان داد. در نهايت روش چلكس با توجه به سادگي، در دسترس بودن و كم خطر بودن به عنوان روشي مناسب با عملكرد بالاو مقرون صرفه براي استخراج دي ان اي زنبورهاي پارازيتوييد جنس Lysiphlebus پيشنهاد شد.

DNA extraction with an appropriate quality and quantity is the first step in molecular identification of some group of insects that their identification morphologically is difficult and dependent on a particular life stage, size or gender. Selection of a suitable protocol is a key factor to provide a pure DNA. In this study quality and quantity of five extraction methods used in entomological laboratories were compared, including: CTAB, Phenol- chloroform, EST, Lysis buffer and Chelex methods. The quality and quantity of the extracted DNA was measured using spectrophotometer. Analysis of variance showed significant differences among the five methods. Results indicated that the Chelex method as a simple, available, the least time-consuming and less hazardous technique yielded the highest amount of DNA as a consequence it is suggested for Lysiphlebus spp. DNA extraction.