شناسايي سريع هليكوباكترپيلوري توسط روش ملكولي PCR در مقايسه با تست اوره آز سريع (RUT)

Rapid detection of Helicobacter pylori by using PCR molecular method compared with Rapid Urease Test

سابقه و هدف: هليكوباكترپيلـوري (H.pylori) به عنوان يك عامل عمده خطـر زخم هاي معده و دوازدهه و سرطان معده شناخته شده است . روش هاي مختلفي براي تشخيص اين ميكروارگانيسم شناخته شده كه متداول ترين آن ها به خصوص در بيماراني كه تحت آندوسكوپي قرار مي گيرند، تست اوره آز سريع (RUT) مي باشد ، اما اين تست براي ايجاد نتايج مثبت و منفي كاذب بالقوه مي باشد . لذا بكارگيري روشي سريع ، ساده و آسان اما با دقت بالا جهت تاييد اين تست در آزمايشگاه ها مورد نياز مي باشد . هدف اين مطالعه ارزيابي ارزش تشخيصي تست اوره آز سريع در قياس با روش ملكولي PCR در شناسايي هليكوباكترپيلوري مي باشد . مواد و روش ها: اين مطالعه بر روي 100 نمونه ي بيوپسي بدست آمده از بيماران مبتلا به سو هاضمه كه تحت آندوسكوپي قرار گرفته بودند انجام شد. تست اوره آز سريع بر روي تمامي نمونه ها صورت گرفت و سپس تست PCR با پرايمرهاي طراحي شده جهت ژن glmM صورت پذيرفت . ارزش تشخيصي تست هاي RUT و PCR با استفاده از نرم افزار SPSS مورد بررسي هاي مقايسه اي قرار گرفت . يافته ها: محصول تست PCR بهينه شده با طول 201 جفت باز به درستي تكثير يافت و بر روي ژل الكتروفورز مشاهده گرديد. بررسي پرايمرهاي انتخاب شده با DNA هاي مختلف ، اختصاصيت بالايي را نشان داد . حساسيت تست PCR به تعداد 10 باكتري (10CFU) با اختصاصيت 100% بود . در اين مطالعه 85% از نمونه ها توسط تست PCR شناسايي شدند در حاليكه تنها 63% از آنها توسط RUT شناسايي شدند. نتيجه گيري: در اين مطالعه ثابت شد كه تست PCR به دليل حساسيت و اختصاصيت بالا مي تواند جهت تشخيص هليكوباكترپيلوري درنمونه هاي باليني و نمونه هاي بدست آمده از تست اوره آز مورد استفاده قرار گيرد.

Aim and Background: Helicobacter pylori has been recognized as a major risk factor for the development of gastritis, gastric and duodenal ulcers and gastric cancer. Various methods have been known to detect this microorganism and the most common method especially in patients undergoing endoscopy is rapid urease test (RUT), but this test is potential to give false positive and negative results. Therefore, using a rapid, simple but high-precision method is needed to confirm this test in laboratories. The objective of this study was to evaluate the diagnostic value of RUT compared to PCR molecular method for the diagnosis of H.pylori. Materials and Methods: This study was carried out on 100 biopsy samples collected from dyspeptic patients attending the endoscopy. The rapid urease test was performed on all samples and the PCR test was conducted with designed primers on glmM gene. Diagnostic values of RUT and PCR were evaluated using SPSS software. Results: The product of optimized PCR with 201bp length correctly amplified and observed on electrophoreses gel. Evaluation of the selected primers with various DNA demonstrated high accuracy. Sensitivity of the test was 10 CFU with 100% specificity. In this study, 85% of specimens were detected with PCR whereas only 63% of them were detected by the RUT. Conclusion: In this study, it has been approved that PCR can be used for the diagnosis of H.pylori on clinical specimens because it is highly sensitive, specific and can be used on biopsy samples from RUT